非洲马瘟病毒可视化RT-LAMP 现场检测方法的建立

2020-08-06李富祥赵文华杨仕标

中国预防兽医学报 2020年6期

李富祥，赵文华，杨仕标

（云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室，云南昆明 650224）

非洲马瘟（African horse sickness，AHS）是AHS病毒（AHS virus，AHSV）引起马属动物的一种急性或亚急性高致死性虫媒（库蠓）传染病，该病以发热、呼吸系统和血液循环系统的病理变化为特征。到目前为止，共发现9 个血清型的AHSV。马、骡、斑马和犬对AHSV 均易感[1]，其中，马的致死率可超过90%[2]，给养马业造成严重危害。AHS 主要在北非、南非、西非（塞内加尔，尼日利亚和冈比亚）和南欧的一些国家爆发和流行[3]。世界动物卫生组织（OIE）将AHS 列为法定报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病和重点防范的外来动物疫病。目前虽然我国尚无AHSV 感染病例的报道，但随着马相关体育竞技、悠闲娱乐、健身等活动逐渐增多，以及国际国内赛马和马术赛日益频繁，我国存在AHS传入风险。因此，建立快速诊断检测方法对于防止AHS传入我国具有重要意义。

目前，国内外AHS 病原诊断方法有病毒分离鉴定[4]、RT-PCR[5-6]、荧光定量RT-PCR[7-8]等。国外也建立了基于扩增曲线判定反应结果的AHSV 血清群特异性反转录环介等温扩增方法（Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification， RTLAMP）[9]，但该方法只能在实验室进行检测；而国内建立的RT-LAMP 方法[10]仅可检测少数几个血清型AHSV，可用于全部9 个血清型AHSV 的RT-LAMP现场检测方法未见国内外报道。本研究根据AHSV VP7 基因保守序列设计型特异性引物，并通过全部9 个血清型AHSV RNA 特异性验证，建立AHSV 血清群特异性可视化RT-LAMP 检测方法，以期为我国AHS 的早期快速现场诊断以及马的出入境提供技术储备。