张志强，张艳英，葛 成，王 苗，杜万年，莘 余，吴同垒，索 勋，李蕴玉*，李佩国*

（1. 河北科技师范学院 河北省预防兽医学重点实验室，河北 秦皇岛 066004；2. 中国农业大学 动物医学院，北京 100094）

O 抗原位于革兰氏阴性菌的最外表面，是具有保护性作用的一种细菌结构。该结构由短的重复的寡糖单元（O 单元）组成，每个寡糖单位含有3～8 个不等的单糖分子[1]。寡糖单位组成和分布的多样性造成了不同种属甚至同一细菌的抗原性差异，同时也是内毒素LPS 的组成成分，其在细菌致病过程中发挥关键作用[2-3]。革兰氏阴性菌O抗原的合成是一个复杂的过程，涉及Wzx/Wzy 途径40 多种酶的参与[4]。细菌首先于细胞内膜表面合成寡糖单位，利用wzx编码的外翻酶将寡糖单元转移至周质间隙，在wzy编码聚合酶作用下进行O 抗原侧链的合成，侧链的组成和长度由wzz 编码蛋白调控；合成的O 抗原在waaL 基因编码的连接酶的作用下结合到脂多糖（LPS）脂质A 核心上，通过Lpt 途径转运到细胞外膜表面[5-6]。

Wzx 翻转酶介导O 抗原合成原料的转运，是O抗原合成的起始和关键环节，前期有研究将Wzx 基因簇缺失，会导致细菌O抗原产量下降以及细菌生长速度的减缓，揭示了其在细菌生长中的重要作用[1]。Wzx 基因簇由多个基因组成[7]，不同的基因发挥何种作用尚不明确。本研究聚焦该基因簇的wzxE 基因，拟通过同源重组方法构建其缺失菌株，通过分析wzxE 基因缺失菌株的生物学特性变化，揭示WzxE翻转酶的生物学功能。

1 材料与方法

1.1 菌株、质粒及主要试剂λ-Red 同源重组系统（包括pKD46、pKD3 和pCP20 质粒）由扬州大学朱国强教授惠赠；……