贾金靖 莫秀梅 刘俊峰 王宁 郑焱 陈达灿

1西安交通大学第二附属医院皮肤科710004；2广州中医药大学第二附属医院皮肤科510120

Yes 相关蛋白（Yes-associated protein，YAP）是Hippo 信号通路的关键组分，其在调控细胞增殖和凋亡等方面发挥重要作用［1-2］。我们的前期研究［3］发现，银屑病皮损YAP 阳性率升高，YAP 主要表达于皮损组织基底层和棘层下部，基底层作为表皮的生发区，提示YAP 在银屑病表皮异常增殖中发挥重要作用。治疗银屑病的方剂中丹参多见［4-5］。体外实验研究表明，丹参素在多种肿瘤细胞中均有抑制细胞增殖、引起细胞周期阻滞、诱导凋亡以及抑制侵袭和转移等作用［6-10］。用含白细胞介素1α（IL-1α）、IL-17、IL-22、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、抑癌蛋白M（oncostatin M）的混合物M5刺激人永生化表皮细胞（HaCaT）后其病理生理学特征与银屑病高度类似，既往有很多文献将其作为银屑病样细胞模型［11-13］。本研究检测丹参素对M5诱导的银屑病样细胞模型中YAP 的表达情况，探讨其对角质形成细胞增殖、细胞周期以及凋亡的影响。

资料与方法

一、实验材料与仪器

HaCaT 细胞（上海复祥生物科技有限公司）、DMEM 培养液（美国HyClone 公司）、丹参素（C9H10O5，相对分子质量162.14，纯度95%，大连美仑生物技术有限公司）、M5（IL-1a、IL-17、IL-22、TNF-α、Oncostatin M，美国PeproTech 公司）。兔抗人YAP 抗体（美国Cell Signaling 公司）。细胞周期相关蛋白抗体：兔抗人细胞周期蛋白A（Cyclin A）、兔抗人Cyclin B1、鼠抗人Cyclin D1、鼠抗人Cyclin E（美国Santa Cruz公司）。细胞凋亡相关蛋白抗体：兔抗人胱天蛋白酶3剪切体（cleaved-caspase-3）、兔抗人p21（沈阳万类科技有限公司），兔抗人Bcl-2、兔抗人BAX（美国Cell Signaling公司）。鼠抗人p53（美国Santa Cruz 公司）。鼠抗人β 肌动蛋白抗体、HRP 标记的羊抗兔二抗、HRP 标记的羊抗鼠二抗（美国Santa Cruz公司）。……