温慧敏，尹小娟，杨 沙，冯光富，陈诗韵

0 引言

小儿骨伤发病率远高于成人，是造成儿童残疾和死亡的重要原因之一[1]。小儿伤科方是四川省骨科医院临床专家、全国重点专科专病(儿童骨科)学术带头人王英主任医师基于中医活血化瘀代表方剂-桃红四物汤加减拟定的小儿骨折协定处方。临床证实其在治疗儿童闭合性骨折方面具有显著的效果。但通过临床观察，闭合性骨折患儿在服用小儿伤科方时依从性较差，其主要原因为汤剂剂型口感差，携带不便，且每日服用剂量也较大。为了满足临床儿科的特殊需求，本团队在前期研究中将小儿伤科汤剂开发为泡腾颗粒，现通过对比观察小儿伤科汤剂与小儿伤科泡腾颗粒对闭合性骨折模型大鼠的治疗效果，拟为小儿伤科泡腾颗粒临床应用和开发提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康SPF级6～8周龄SD大鼠45只，体重(260±20) g，雄性，购于成都达硕实验动物有限公司，动物许可证号：SCXK(川)2015-030。试验前在照明12 h、通风良好的条件下适应性饲养观察7 d。

1.2 实验材料 小儿伤科汤剂，四川省骨科医院药剂科自制；小儿伤科方泡腾颗粒(实验室自制)；生理盐水购于成都市科隆化学品有限公司，批号：100503。大鼠血清钙试剂盒(批号：20190423)、血清磷试剂盒(批号：20190423)、血清碱性磷酸酶(ALP)试剂盒(批号：20190423)均购于中生北控生物科技股份有限公司。

1.3 实验仪器 重力造模骨折器(实验室自制)；BT1250型十万分之一电子天平购于北京赛多利斯仪器系统有限公司；PL-203型电子天平购于上海梅特勒-托利多仪器有限公司；Neofuge 15R型台式高速冷冻离心机(Heal Force)；X线摄片机(四川省骨科医院放射科提供)。

1.4 造模方法 参考文献[2]，采用重力造模法进行造模。造模前选取右侧胫骨进行备皮，以3%戊巴比妥钠溶液按0.2 ml/100 g体重腹腔注射进行麻醉，仰卧位固定大鼠于带有1.5 cm缝隙的模板上，胫骨横跨缝隙，皮肤表面覆盖纱布，用重力500 g砝码于30 cm处自由下落，冲击胫骨造成胫骨中下段骨折。

1.5 分组方法 根据随机数字表原则，将模型大鼠随机分为对照组、汤剂组和颗粒组，每组各15只。

1.6 干预方法 所有大鼠在造模完成后均行外夹板固定。汤剂组大鼠采用小儿伤科汤剂进行灌胃，颗粒组采用小儿伤科方泡腾颗粒进行灌胃，依照临床用药剂量进行折算给药(8 g/kg，按生药量计)，对照组大鼠给予同体积温开水灌胃进行对照。试验期间，每天定时按剂量灌胃给药1次，记录其饮水量和采食量及行为表现。

1.7 观察指标

1.7.1 血清生化指标 分别在治疗14 d、28 d、35 d时，每组随机选取5只大鼠，以3%戊巴比妥钠溶液按0.2 ml/100 g体重腹腔注射进行麻醉，采集腹主动脉血10 ml，在3 000 r/min下离心10 min，利用试剂盒检测血清钙、血清磷、血清ALP指标，并记录。

1.7.2 X片检查 采集腹主动脉血后，放血处死大鼠，送至四川省骨科医院放射科进行X摄片检查，观察骨折愈合情况，以Lane-Sandhu X射线评分标准[3]评价骨缺损修复情况。

2 结果

2.1 三组大鼠血清生化指标比较 治疗14 d时，三组大鼠血清钙、血清磷、血清ALP指标分别比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗35 d时，汤剂组和颗粒组大鼠血清钙指标低于对照组(P<0.05)。但汤剂组和颗粒组大鼠比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗28 d、35 d时，汤剂组和颗粒组大鼠血清ALP高于对照组(P<0.05)。见表1～表3。

表1 三组大鼠血清钙指标比较(mmol/L)

表2 三组大鼠血清磷指标比较(mmol/L)

表3 三组大鼠血清ALP指标比较(U/L)

2.2 三组大鼠Lane-Sandhu评分比较 治疗14 d时，三组大鼠Lane-Sandhu评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗28 d、35 d时，汤剂组和颗粒组大鼠Lane-Sandhu评分均高于对照组(P<0.05)，但汤剂组和颗粒组大鼠Lane-Sandhu评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 三组大鼠Lane-Sandhu评分比较(分)

3 讨论

小儿伤科方由桃仁、红花、当归、生地黄、川芎、赤芍、牡丹皮、川木通、酒大黄、延胡索、川楝子、茯苓、三七等中药组成。方中桃仁、红花、川芎活血化瘀，生地、当归、赤芍可加强活血化瘀作用，并且当归具有补血养肝之功，赤芍有凉血消肿之效[4-6]。延胡索活血，行气，止痛，川楝子可增强行气止痛之功[7]。诸药共奏活血化瘀，行气止痛之功。临床实践证明，小儿伤科方对儿童骨折的愈合、骨性关节炎的防治具有良好的效果。相比于传统汤剂，颗粒剂可满足儿童服药特殊要求，并且具有生产方便、服用量小、不易霉变、易携带等优势[8]。但这两种制剂是否具有同等的治疗效果，尚未见报道。为了解决这一问题，本研究选取幼年大鼠作为研究对象，通过制作闭合性骨折模型，对比分析了小儿伤科汤剂和小儿伤科泡腾颗粒对模型大鼠的治疗效果。

本研究结果显示，治疗35 d时，汤剂组和颗粒组大鼠血清钙指标低于对照组，但汤剂组和颗粒组大鼠比较差异无统计学意义。治疗28 d、35 d时，汤剂组和颗粒组大鼠血清ALP明显高于对照组，但汤剂组和颗粒组大鼠比较差异无统计学意义。结果表明，小儿伤科汤剂和小儿伤科泡腾颗粒对加速钙沉积具有积极的作用。骨折发生后，在破骨细胞活动下，钙离子释放入血，使血中钙离子升高，随着骨折的愈合，血中钙离子逐渐降低，钙盐沉积[9-10]。相比于仅做内固定干预的对照组大鼠，无论是使用汤剂还是颗粒进行干预，其均具有降低钙离子、加速钙盐沉积的作用，并且二者效果等同。既往研究认为，骨折愈合过程中，磷离子呈现逐渐升高的趋势，在4～5周达到高峰[11]。本研究尚未发现小儿伤科汤剂或小儿伤科泡腾颗粒对磷离子存在显著影响，这可能是观察时间较短所致。但也应看到，小儿伤科汤剂和小儿伤科泡腾颗粒对磷离子的影响效果是等同的。目前认为，ALP是反映成骨细胞功能和分化程度的指标之一，ALP表达的升高可作为成骨细胞成熟的标志之一[12]。本研究结果提示，小儿伤科汤剂和小儿伤科泡腾颗粒可在骨折愈合过程中促进成骨细胞成熟，且二者具有等同的效果。

X片结果显示，治疗28 d、35 d时，汤剂组和颗粒组大鼠Lane-Sandhu评分均明显高于对照组，但汤剂组和颗粒组大鼠Lane-Sandhu评分比较差异无统计学意义。Lane-Sandhu X射线评分标准从骨形成、骨连接、骨塑形3个方面对骨折愈合情况进行形态学上的评价，是目前动物实验和临床研究中用于反映骨折愈合的常用指标之一[13]。

综上所述，小儿伤科汤剂与小儿伤科泡腾颗粒治疗闭合性骨折模型大鼠效果无显著差异，为小儿伤科泡腾颗粒的临床应用和开发提供了数据支持。