梁嘉乐，彭伟康，陈诗曼，罗 芬，张志珍，马卫列，丁 航*

(1.广东医科大学 医学技术学院，广东 东莞 523808；2.广东医科大学 生物化学与分子生物学教研室，广东 东莞 523808)

儿茶，又名乌爹泥、乌垒泥、乌丁泥，为豆科植物儿茶的枝干或茜草科植物儿茶钩藤的枝叶煎汁浓缩而成的干燥浸膏。儿茶在我国应用广泛，早在明朝，《本草述》便对其有详细记载； 现代临床应用于小儿消化不良、腹泻、外用治疗溃疡、湿疹等 症。儿茶素为儿茶的主要有效成分，近年来已有的研究表明， 儿茶素类物质有抗癌、抗心律失常、调血脂、抗病毒等活性[1]。课题组前期已对儿茶的水溶性物质进行了提取，并在细胞水平观察了最大无毒浓度范围，本实验在此基础上，进一步研究儿茶水提物的体外抗甲型流感病毒(influenza A virus，IAV)的作用，以期为开发出高效安全、副作用小的抗流感病毒新药物提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 仪器

隔水式恒温培养箱(上海博讯公司)；CO2细胞培养箱(NUAIRE公司)；RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；细菌培养摇床(上海和程仪器制造有限公司)；多功能酶标仪(基因有限公司)；荧光分光光度仪(美国Bio-Rad公司)。

1.1.2 材料

中药儿茶浸膏购自东莞国药；犬肾(MDCK)细胞、293T细胞、pcDNA3.1质粒、甲型流感病毒反向遗传8质粒病毒系统、pHH-Gluc质粒由本室保存。DMEM高糖培养基和胎牛血清(FBS)购自Gibco公司；转染试剂(LipofectamineTM2000)购自Invitrogen公司；荧光素酶活性测定底物购自Promega公司；CCK-8试剂盒购自Dojindo公司。其他的是国产分析纯试剂。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养

MDCK细胞和293T细胞用含10% FBS的DMEM高糖培养基培养于10 cm细胞培养皿中，两天或三天传代一次。……