崔士猛，杜 渐，罗海峰，闻庆平，苗 壮，温 超，吴 越

研究表明[1-2]长链非编码RNA (long non-coding RNA, lncRNA)在多种癌症类型的基因组改变、诊断、预后和治疗预测中发挥着关键作用。到目前为止，lncRNA在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中已被证实在肿瘤细胞生长、化疗敏感性、药物诱导的细胞凋亡、肿瘤干细胞调控、治疗结果预测和病毒性肝炎相关进展中发挥重要作用[3-5]。因此，lncRNA作为HCC发病机制的调控因子，被认为是潜在的癌症治疗靶点。

TCGA数据库表明PVT1在HCC组织中表达明显上调。课题组的细胞水平研究显示，PVT1促进了HCC细胞增殖与迁移；通过生物信息学软件预测提示PVT1存在与miR-17-5p靶向结合的位点；而miR-17-5p在HCC中常呈低表达并影响其发生发展。现通过实验证明PVT1与miR-17-5p之间存在特异性调控关系，进而影响HCC细胞的增殖和迁移能力，为PVT1调控HCC细胞的分子机制奠定了理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料细胞株HepG2和Huh7购自上海中乔新舟公司；DMEM、胎牛血清及胰酶均购自美国Gibco公司。培养基通过DMEM添加10%胎牛血清进行配置，4 ℃保存不超过1周。细胞培养于37 ℃、5% CO2的培养箱中，每1～2 d换液1次，待细胞生长融合度达到80%～90%对细胞进行传代。

RIPA裂解液、BCA试剂盒、TRIzol提取试剂均购自北京碧云天公司；cDNA逆转录试剂盒及SYBR Green RealTime PCR MasterMix购自美国Invitrogen公司；CCK-8试剂盒及Lipofectamine 3000购自美国Invitrogen公司；lncPVT1及siPVT1由上海吉玛公司构建；miR-17-5p模拟物、抑制剂及阴性对照寡核苷酸由上海吉玛基因设计及合成；双荧光素报告基因试剂盒购自美国Invitrogen公司。

1.2 方法

1.2.1细胞转染 转染前对细胞进行观测，待细胞融合度达到50%～70%时对细胞进行si-PVT1及miRNA的转染，NC为空载体，作为阴性对照。……