过表达miR-34a脂肪干细胞外泌体调控增生性瘢痕成纤维细胞增殖及凋亡的研究
2020-07-13肖向阳郑德义王宝云李自力
肖向阳,郑德义,王宝云,李自力
长期愈合的软组织伤口容易形成瘢痕,这不利于伤口愈合质量[1]。因此,缩短软组织创伤愈合时间,减少瘢痕形成,是临床急需解决的问题。脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)能分泌多种可溶性因子,如生长因子、细胞因子、胞外体等[2]。外泌体是一个40~100 nm大小的细胞外小泡,形成于胞质并释放到细胞外环境[3]。研究[4]表明ADSCs或其外泌体能够促进真皮成纤维细胞在伤口愈合过程中的迁移,并且在促进皮肤或黏膜软组织创伤修复中有积极作用。miRNAs在细胞增殖凋亡等各种细胞反应中具有重要要作用,研究[5]表明miR-34a在ADSCs作用中过表达能影响细胞周期及增殖,但在ADSCs外泌体干预人增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar fibroblasts,HSF)增殖凋亡情况中的作用尚不可知。因此该研究以HSF为研究对象,将其与过表达miR-34a的ADSCs外泌体共培养后,探讨miR-34a在ADSCs外泌体影响HSF增殖、凋亡过程中的具体作用机制,以期为临床研发新的治疗瘢痕疙瘩的治疗方案提供实验证据。
1 材料与方法
1.1 材料人脂肪组织来源于贵州省人民医院整形外科的一名27岁进行吸脂术的健康女性,术前签署知情同意书;HSF购自上海素冉生物科技有限公司;miR-34a过表达及其阳性对照慢病毒(2×108PFU/ml)购自上海汉恒生物科技有限公司;DMEM培养基购自北京索莱宝科技有限公司;胎牛血清购自美国HyClone公司;胰蛋白酶和胶原酶购自美国Gibco公司;TRIzol试剂购自美国Invitrogen公司;MTT试剂盒、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒、ECL化学发光试剂盒以及蛋白酶抑制剂均购自上海碧云天生物技术有限公司;……
