徐 瑶，邓晓杨, 张 勇,3，吴 雯，肖 琳，张小虎

卵巢癌是一类发病率较高的妇科恶性肿瘤，死亡率在妇科恶性肿瘤中居首[1]。调查[2]显示，约65%的卵巢癌患者处于癌症晚期，经手术及放化疗后仍预后不良，5年生存率≤30%。此外，近年来卵巢癌患者趋于低龄，卵巢癌发病率逐年递增[3]，因此寻找有效治疗方法显得十分迫切。微小型RNA miR-206在卵巢癌中发挥抑癌作用，可抑制癌细胞的生长和癌组织的转移[4]。而miR-206在卵巢癌中的抑癌机制还有待进一步研究。因此，该文通过上调miR-206，对其在卵巢癌细胞CAOV3中的作用机制进行了深入探究，为miR-206靶向治疗卵巢癌提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 细胞株与主要试剂卵巢癌细胞CAOV3购自美国典型培养物保藏中心；荧光素酶系统检测试剂盒、反转录试剂盒、实时定量PCR试剂盒和Lipofectamine2000转染试剂盒均购自美国Thermo Fisher公司；TRIzol及Opti-MEM均购自美国Invitrogen公司；miR-206 mimic和pc-MAPK1质粒由上海生工生物设计并合成；Brdu试剂盒购自瑞士Roche公司，Transwell小室购自美国Corning公司；促分裂原活化蛋白激酶1 (mitogen activated protein kinase 1，MAPK1)、上皮型钙黏附蛋白(epithelial calcium adhesive protein，E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、cAMP反应元件结合蛋白(CAMP reactive element binding protein，CREB)、P-CREB、Ets样转录因子-1(Ets-like transcription factor-1，Elk-1)、P-Elk-1、原癌基因(proto-oncogene，c-Myc)及P-c-Myc兔来源单克隆一抗抗体购自美国Abcam公司；实验所用二抗均购自上海博士德生物公司；RPMI 1640培养液、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)购自美国Gibco公司，青霉素、链霉素、RIPA裂解液、DAPI及BCA试剂盒购自上海碧云天公司。

1.2 细胞培养与分组转染体积分数10% FBS、100 U/ml青霉素、100 μg/ml链霉素的RPMI 1640，37℃、5% CO2培养。细胞传代次日换液，融合率达到85%时，以1×104个/ml的浓度再次传代。将细胞分为Control、miR-206 mimic、pc-MAPK1及miR-206 mimic+pc-MAPK1组，根据Lipofectamine 2000说明书将miR-206 mimic质粒、pc-MAPK1质粒分别或联合转染进入miR-206 mimic、pc-MAPK1及miR-206 mimic+pc-MAPK1组CAOV3细胞，Control组加入等量空载。……