赵 丹，李贤玉，袁美春，吴 艳，石柳柳，张志锋

脑出血(intracerebral hemorrhage，ICH)是指非外伤性脑实质内血管破裂引起的出血，占全部脑卒中的20%～30%，具有高发病率、高死亡率、高致残率的特点。然而，至今无有效治疗措施[1-4]。脑血管破裂后，血液破入脑实质，红细胞中血红蛋白释放的血红素对细胞产生毒性作用，加重ICH后脑损伤[5]。E2F转录因子1(E2F transcription factor 1, E2F1)是调控细胞周期进程及细胞凋亡的核心参与者[6-7]。研究[8]提示E2F1促进缺血性脑损伤后神经元死亡、加重脑损伤。而E2F1在ICH中的作用尚不清楚。该实验用血红素处理大鼠原代皮层神经元，模拟ICH中血红素对神经元的毒性作用，探索E2F1在血红素诱导的神经元损伤中的作用及机制，以期为临床治疗ICH提供干预靶标及实验基础。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂12只SD妊娠大鼠(体质量300～350 g)由湖北医药学院动物实验中心。兔抗大鼠E2F1单克隆抗体(ab179445)购自英国Abcam公司；小鼠抗大鼠NeuN单克隆抗体购自美国Millipore公司；Alexa Fluor®488标记的驴抗鼠抗体及Alexa Fluor®546标记的驴抗兔抗体购自美国Santa Cruz公司；HRP标记的山羊抗兔IgG购自武汉科瑞生物技术有限公司。 血红素购自美国Sigma-Aldrich公司；MTT细胞毒性检测试剂盒购自上海碧云天生物技术公司；LDH细胞毒性检测试剂盒购自美国Promega公司；Neurobasal及B27购自美国GIBCO公司；E2F1 siRNA及Control siRNA购自美国Santa Cruz公司；Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司。TUNEL细胞凋亡检测试剂盒购自上海碧云天生物技术公司；caspase活性检测试剂盒、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、PVDF膜和化学发光试剂购自美国Millipore公司；DMI3000B型荧光显微镜购自德国Leica公司。

1.2 皮层神经元分离培养及鉴定大鼠妊娠至17 d，4%异氟烷麻醉，颈脱臼处死。……