李汉青，王 芳，何家才

探索能有效抑制过度破骨细胞形成和功能的药物对于预防和治疗炎症引起的种植体周围骨吸收至关重要[1-2]。核因子κB受体活化因子配体 (receptor activator of nuclear factor-κ B ligand，RANKL)是肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)超家族的成员，来源包括巨噬细胞、成纤维细胞、成骨细胞和 T 细胞[3]。RANKL可以通过与破骨前体细胞表面的RANK特异性的结合，激活下游信号通路，诱导调节破骨细胞形成。石斛为兰科石斛属多种植物的新鲜或干燥茎的统称。在石斛属植物中，铁皮石斛被认为具有最佳的中药药用特性，特别是富含多糖的茎和叶，近来的一些研究[4]表明石斛多糖具有抗癌、抗感染、免疫增强等生物活性。该研究旨在探讨铁皮石斛多糖对 RANKL诱导BMMs向破骨细胞分化的影响，以期为种植体周围骨吸收的治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器MEMα培养基(美国赛默飞公司)；PBS缓冲剂(美国Solarbio公司)； BI胎牛血清(以色列生物工业公司)；RIPA 裂解液、蛋白酶磷酸酶抑制剂(上海碧云天生物技术有限公司)；重组小鼠RANKL(美国R&D公司)；重组小鼠M-CSF(美国R&D公司)；蛋白浓度测定试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)；CCK-8试剂(日本同仁化学研究所)；PCR引物逆转录试剂盒、RT-PCR试剂盒(日本TaKaRa公司)；c-Fos鼠单克隆抗体(武汉谷歌生物科技有限公司)； p65兔单克隆抗体(美国ABCAM公司)；NFATc1兔单克隆抗体、phospho-p65(p-p65)兔单克隆抗体、P38兔单克隆抗体、phospho-p38(p-p38)兔单克隆抗体(美国CST公司)；Actin鼠单克隆抗体(北京中杉金桥公司)；山羊抗鼠/兔二抗(北京中杉金桥公司)；牛血清白蛋白(BSA)(德国BioFROXX公司)；恒温CO2培养箱(美国赛默飞公司)；……