张国臣 常玉喜 韩 磊 徐 欣 赵 明 陈忠平

O6-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶（O6-methylguanine-DNA methyltransferase，MGMT）可以修复烷化剂对染色体的致癌、致突变和细胞毒作用的损伤。在正常情况下，MGMT对细胞起保护作用，但是在胶质瘤的化疗过程中，MGMT 可以修复化疗药物对胶质瘤细胞产生的杀伤，从而降低化疗疗效[1]。MGMT 基因启动子甲基化（简称MGMT 甲基化）可以降低MGMT的表达。本文定量分析新诊断胶质瘤MGMT甲基化水平，为临床诊治提供参考。

1 资料和方法

1.1 标本来源 收集郑州大学附属肿瘤医院神经外科2016年1月至2019年6月手术切除并经病理诊断为胶质瘤标本225例，其中男116例，女109例；平均年龄（48.71±14.82）岁；少突胶质细胞瘤50 例（WHO分级Ⅱ级36 例，Ⅲ级14 例），星形细胞瘤109 例（WHO分级Ⅰ级4例，Ⅱ级58例，Ⅲ级47例），少突星形细胞瘤9 例（WHO 分级Ⅱ级），胶质母细胞瘤（WHO分级Ⅳ级）57例。

1.2 入组标准 经手术病理证实为胶质瘤；新诊断初治胶质瘤；肿瘤组织行MGMT甲基化水平检测。

1.3 排除标准 术后病理证实为非胶质瘤；既往经过放、化疗等治疗的复发胶质瘤；肿瘤组织未行MGMT甲基化水平检测。

1.4 MGMT 的检测 采用焦磷酸测序仪（美国QIAGEN 公司，Qiagen PyroMark Q24），严格按照Human MGMT Gene methylation Detection Kit 试剂盒（美国QIAGEN公司）说明书进行测序。采用TIANamp FFPE DNA Kit 提取DNA，DNA 浓度为20 ng/μl，OD 260/280 为1.82，检测灵敏度为1%（10 ng/μl DNA），引物类型为YGAYGTTYGTAGGTTTTYGT。标本类型为石蜡块。结果判读：选择MGMT 基因启动子区甲基化水平最高的4 个CpG 位点，将各位点的甲基化水平以百分率的形式作为定量数据，取4 个位点的平均值作为最终MGMT甲基化水平。

1.5 判断标准 健康人群血液平均检测值：MGMT 甲基化水平≤4%。胶质瘤平均检测值：MGMT 甲基化水平≥8%为阳性，否则判为阴性，其中MGMT甲基化水平≥40%病人，替莫唑胺化疗总生存期明显延长[2]。……