陈旭杰，罗 明

（南阳市第二人民医院1 心血管内科；2 妇产科，河南 473000）

慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）是各种心脏疾病的最终结局[1]，临床主要表现为呼吸困难和体液潴留，5 年存活率与恶性肿瘤相仿[2]。有研究表明，miR-21 参与心肌梗死、冠心病等多种心血管疾病发生过程[3]。组织基质金属蛋白酶抑制剂-3（tissue matrix metalloproteinase inhibitors，TIMP3）是miR-21 靶基因之一，可导致心肌纤维化[4]。本研究选取 2016 年 4 月—2018 年 6 月我科收治的 114 例CHF 患者，探讨血清miR-21、TIMP3 表达情况及其与心肌重构和心功能的相关性，为临床评估CHF 提供参考指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料 CHF 患者114 例，其中男性54 例，女性 60 例；年龄 38～67 岁，平均 52.38±6.29 岁；按《慢性心力衰竭诊断治疗指南》[5]进行心功能分级：Ⅰ～Ⅱ级35 例、Ⅲ级40 例、Ⅳ级39 例。纳入标准：（1）符合《慢性心力衰竭诊断治疗指南》关于CHF 诊断标准，并经心电图、超声心动图、胸部X 线检查确诊；（2）心脏病史 6 个月以上。排除标准：（1）合并肝、肾等多器官衰竭者；（2）入院前30 天内接受介入术治疗者；（3）伴有心脏瓣膜病、肺动脉栓塞者。另取同期健康体检正常者40 例为对照组。所有研究对象签署参加本研究的知情同意书。本研究获得医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 血清miR-21、TIMP3 mRNA 检测：抽取研究对象早晨空腹静脉血5 mL，-4 ℃冷冻离心10 min，分离血清，-80 ℃保存待测。采用qRT-PCR 法测定血清miR-21、TIMP3 mRNA 相对表达量。按Trizol试剂盒说明书操作提取组织总RNA，按miRNA 反转录试剂盒操作步骤将2 μg RNA 反转录为cDNA，按SYBR Green RCR master mix 试剂说明配置反应体系。qRT-PCR 反应体系 20 μL：SYBR Premix Ex Taq Ⅱ（2×）10 μL，cDNA 2.0 μL，上下游引物各 0.8 μL，ROX Reference Dye Ⅱ（50×）0.4 μL，ddH2O 6.0 μL。在荧光定量PCR 仪上进行反应，程序设定：95 ℃预变性 4 min；95 ℃ 15 s ，60 ℃ 30 s，72 ℃ 15 s，共 41个循环，72 ℃终延伸 10 min。miR-21 以 U6 为内参基因，TIMP3 mRNA 以β-actin 为内参基因。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物设计见表1。……