朱东来　王婷　陆静　邵江波

【摘要】目的：研究白细胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）和白细胞介素-17（Interleukin-17，IL-17）在免疫性血小板减少症（Immune thrombocytopenia，ITP）治疗前后的血清表达水平，为ITP治疗提供理论依据。方法：采取酶联免疫吸附法（ELISA）检测30例原发性ITP患者治疗前后血清IL-10和IL-17表达水平。进一步按照患者体重指数BMI进行分组，分析BMI正常组和超重组IL-10和IL-17表达水平的差异。结果 BMI正常组和超重组IL-10和IL-17表达水平均无明显差异。ITP患者有效治疗后的血清IL-17的表达水平较未治疗时显著降低（P<0.05），IL-10无明显差异。结论：IL-17表达水平的增高可能参与了ITP的发病， IL-17水平对ITP患者临床治疗有一定指导意义。

关键词：白细胞介素-10;白细胞介素-17;免疫性血小板减少症

Abstract： Objective To investigate the expression of interleukin-10 （IL-10） and interleukin-17 （IL-17） before and after the treatment of immune thrombocytopenia （ITP）， which would provide a theoretical basis for the treatment of ITP. Methods The expressions of IL-10 and IL-17 of 30 ITP patients before and after treatment were detected by ELISA. Then they were divided into two groups according to BMI. One group is normal BMI and another is overweight BMI. The relationship between BMI and the expression of IL-10 and IL-17 were analyzed. Results There were both no statistically significant differences of the expression of IL-10 and IL-17 in normal BMI group and overweight BMI group （P>0.05）.The average expression level of serum IL-17 in effective treated ITP patients was significantly lower than that in the untreated group （P<0.05）， but there was no significant difference in IL-10 （P>0.05）. Conclusion Abnormal expression of serum IL-17 is involved in the pathogenesis of ITP， and IL-17 levels are significantly decreased after treatment is effective. Therefore， IL-17 has certain guiding significance in the treatment of ITP patients.

Key words：Interleukin-10; Interleukin-17; Immune thrombocytopenia

免疫性血小板减少症（Immune thrombocytopenia，ITP）为免疫介导的临床出血性疾病，以骨髓中巨核细胞发育障碍、血小板数量减少、广泛的皮肤黏膜及内脏出血、出血时间延长和血块收缩不良为主要特征。ITP是一种复杂的自身免疫性疾病，外周血血小板计数通常小于100×109/L。自身抗体致敏的血小板被单核巨噬细胞系统吞噬破坏是ITP发病的主要机制。Cines等人发现ITP的免疫耐受缺陷主要分为三类，包括：（1）在免疫刺激时产生的外周免疫耐受缺陷;（2）B细胞的分化缺陷;（3）中枢耐受缺陷。外周免疫耐受性丧失而引起的ITP更易于治疗，并且在治疗后复发的可能性较小，而中枢免疫耐受性的缺陷会影响多种细胞类型，且接受治疗的患者更容易复发。虽然抗血小板糖蛋白抗体（HPA）的存在传统上被认为起着核心作用，近年来细胞因子紊乱在ITP中的作用逐渐得到了研究者们的关注。为了揭示相关炎症因子在疾病发生发展过程中的作用，本研究采用ELISA方法检测30例原发性ITP患者治疗前和治疗有效后的IL-10和IL-17表达水平，为ITP治疗提供理论依据。

1.资料与方法

1.1一般资料

选取我院2019年1月至2019年8月30例原发性ITP，纳入标准：ITP患者符合2013年ITP疾病诊治建议：（1）正常血细胞形态，血小板计数小于100×109/L;（2）全身皮肤有瘀点/瘀斑、出血點或脏器出血和黏膜等情况;（3）一般脾脏无增大;（4）骨髓常规可见巨核细胞计数正常或增多，有成熟障碍， 以颗粒巨核细胞增生为主;（5）本研究经医学伦理委员会批准，所有患者或家属均自愿签署知情同意书。排除标准：（1）系统性红斑狼疮患者;（2）遗传性血小板减少症或以血小板计数减少为主要表现的再生障碍性贫血患者;（3）低增生性白血病者;（4）其他自身免疫性疾病患者。

1.2 仪器和方法

（1）仪器：全自动血液分析仪。（2）试剂：人白介素10试剂盒，人白介素17试剂盒。（3）采集血液样本：ITP患者刚入院时空腹抽静脉血2mL，治疗好转后空腹抽静脉血2mL，肝素抗凝，12000rpm离心2min，分离血清标记好后保存于-20℃待检。（4）收集好标本后通过ELISA法检测IL-10和IL-17水平。（5）统计学分析：正态分布资料采用平均数±标准差（X±S）表示，采用配对T检验比较治疗前后两组IL-10和IL-17的差异，p<0.05为有统计学意义。采用独立样本t检验比较BMI正常组和超重组IL-10和IL-17表达差异，以p<0.05为有统计学意义。

1.3观察指标与评价标准

对每位研究对象记录性别、年龄、BMI、血小板数量、入院时IL-10、IL-17的表达水平，治疗有效后血清IL-10和IL-17的表达水平。按相关标准，治疗有效为无出血，治疗后血小板计数大于30×109/L，增加两倍基础血小板计数;ITP疗效判断需行2次检测，2次间隔7天及以上。

2.结果

2.1 ITP患者一般情况

30例原发性ITP并行HPA检测的患者中男14例，女16例;年龄6岁-60岁。

2.2 ITP患者不同体重指数IL-10和IL-17水平比较

根据体重指数不同分为BMI正常和超重组，其中BMI正常组13例，超重组17例。采用两独立样本t检验对两个体重组的IL-10和IL-17进行比较。不同BMI组IL-10和IL-17表达水平比较，BMI正常组和BMI超重组比较IL-10和IL-17表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。详见表1。

2.3 ITP患者治疗前后IL-10和IL-17水平比较

采用配对t检验进行治疗前和治疗有效后的IL-10和IL-17血清表达水平的比较，治疗有效后IL-10表达水平与治疗前差异无统计学意义（P>0.05）。治疗有效后IL-17表达水平与治疗前差异有统计学意义（P<0.05）。详见表2。

2.4 ITP患者治疗前血小板数量与IL-10和IL-17水平相关性分析

采用SPSS双变量相关性分析血小板数量与IL-10表达水平的相关性，两组相关系数为-0.9，P=0.636，认为两组无相关性;分析血小板数量与IL-17表达水平的相关性，两组相关系数为-1.42，P=0.453，认为两组无相关性。

3.讨论

白细胞介素、集落刺激因子、干扰素、肿瘤坏死因子、转化生长因子-b、生长因子和趋化因子等都属于细胞因子，其中白细胞介素由淋巴细胞、单核细胞或其它非单个核细胞产生，在细胞间的相互作用、免疫调节、造血以及炎症过程中起重要调节作用。

IL-10是一种多细胞源、多功能的细胞因子，是目前公认的炎症与免疫抑制因子。它与其受体结合后可以抑制Th1细胞分泌IL-2、IL-3、干扰素和集落刺激因子，同时可以抑制自然杀伤细胞的活性，干扰巨噬细胞产生细胞因子等。研究发现IL-10与多种自身免疫病密切相关，例如系统性红斑狼疮，银屑病，皮肌炎和类风湿性关节炎等。研究证明IL-10在系统性红斑狼疮病人血清中明显升高，且与抗核小体抗体呈正相关，与疾病活动性有关。因此我们推测IL-10可能在ITP中也有相似的变化。Talaat RM通过对35名ITP患者和15名健康志愿者对比研究发现，IL-10在ITP患者中水平明显升高。Tesse R等对IL-10基因启动子区三个位点的基因多态性（-1082 （A/G），-819 （C/T） 和 -592 （C/A））进行研究发现GCC基因型的ITP患者表达更高水平的IL-10，且92%的GCC型ITP为急性病程。本研究虽然没有做疾病组与正常组的对比研究，而是将ITP患者治疗前和治疗有效后的IL-10表达水平做对比研究，发现ITP患者治疗前后IL-10无明显变化，这可能与样本数较少有关。

Th17细胞是CD4+T细胞的一种亚型，主要分泌IL-17，IL-17 是一种致炎细胞因子，可以促进T 细胞的激活和刺激上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞产生多种细胞因子如IL-6、IL-8、粒细胞-巨噬细胞刺激因子（GM-CSF）及细胞黏附分子1（cellular adhesion molecule 1，CAM-1），从而导致炎症的产生。大量研究表明，IL-17与实验性自身免疫性脑炎（EAE）、哮喘、类风湿性关节炎（RA）等自身免疫性疾病明显相关。因此我们推测IL-17有可能在ITP的发生发展中起着重要作用。有研究对30例ITP患者进行IL-17检测，发现治疗前后IL-17无明显变化，Zhou ZJ等对54例ITP患者和40例健康对照进行Th17和IL-17检测，发现ITP患者Th17和IL-17均明显升高。Qian C等对45 ITP患者和30例健康对照者进行IL-17检测，发现ITP患者IL-17明显升高，且IL-17水平与血小板数量负相关。本实验中IL-17在ITP患者治疗有效后明显低于治疗前，但是和血小板数量无相关性，提示IL-17与ITP发生密切相关。各研究之间结果的矛盾这可能是由于样本数量较少，从而影响了结果的可信度。

4.结语

综上所述，免疫激活和耐受平衡的打破在ITP的发生中扮演着重要的作用，细胞因子的变化较好的反应了机体免疫功能的变化。本研究中IL-10在ITP治疗前后无明显变化，而IL-17在ITP治疗有效后出现了明显的下降，反映了机体炎症得到一定程度的抑制，故对IL-17的检测在反映ITP的治疗效果方面具有重要的临床价值。

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【作者簡介】朱东来（1976.05-），男，汉族，江苏省镇江市人，本科学历，镇江市第三人民医院主管检验师，主要研究方向：临床检验学。