岳增文 王树斌 刘进忠

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC),是口腔颌面头颈部常见的恶性肿瘤，近年来发病率有上升的趋势，目前在口腔癌中的比例已超过90%[1]。OSCC严重威胁着人们的健康，而明确其发病机制，有针对性采取预防和干预措施，一直是研究人员努力的方向。

前期研究中发现大肿瘤抑制因子2(large tumor suppressor homolog 2,LATS2)基因在口腔鳞癌组织中的表达明显低于正常口腔黏膜组织，且LATS2启动子区域的高度甲基化与其低表达明显相关[2-3]。通过过表达LATS2基因后口腔鳞癌细胞的增殖显著受到抑制，且促凋亡蛋白Bcl表达明显上调，细胞凋亡增加。先前的研究发现LATS2在肿瘤发展和细胞周期调控中起重要作用，并且可通过下调抗凋亡蛋白Bcl家族表达，以及诱导前凋亡蛋白Bax、p53和caspase3等方式促进细胞凋亡[4-5]。在细胞生理过程中，自噬、凋亡、程序性坏死都是细胞死亡形式，它们相互影响、相互调节，自噬可能在此过程中扮演重要的角色。本研究通过在口腔鳞癌细胞中过表达LATS2来观察其对OSCC细胞自噬功能的影响，以探讨其在OSCC发生、发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 主要材料与仪器

人口腔鳞癌细胞株SCC-25(ATCC,美国典型培养物收藏中心)；慢病毒转染LATS2于SCC-25的稳定细胞系已成功构建，该病毒载体无GFP荧光标签。细胞于37 ℃、5%CO2细胞培养箱内常规孵育。DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(Gibco公司,美国)；PBS、青霉素和链霉素(Hyclone公司,美国)；抗LATS2多克隆抗体、抗Beclin-1抗体(Abcam公司,美国)；抗LC3B抗体(Cell signaing公司,美国)；小鼠抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH) 多克隆抗体(上海威奥生物技术公司)；H-800型透射电镜(日立,日本)；……