姚祺 郭辉 陈玲玲 陈秀萍 林东梅 陈山源

摘要 目的：探讨桂枝茯苓丸治疗子宫肌瘤模型大鼠的作用机制。方法：60只成年雌性SD大鼠随机分为4组：分为空白（Control）组、模型（Hys）组、桂枝茯苓丸低剂量（G-L）组、桂枝茯苓丸高剂量（G-H）组，每组15只。除假手术组外，其余3组均进行子宫肌瘤造模。G-L组、G-H组分别接受浓度为1.32 g/mL、2.64 g/mL的桂枝茯苓丸混悬液1 mL灌胃，其中Control組及Hys组大鼠给予等剂量生理盐水灌胃，1次/d，连续8周。记录各组大鼠子宫及卵巢系数，HE染色观察子宫形态学变化，透射电镜观察子宫超微结构变化，ELISA法检测子宫组织E2、P、ER含量，Western Blot法检测子宫组织中PI3K/Akt信号通路蛋白表达情况。结果：与Control组比较，Hys组的子宫和卵巢系数、E2、P、ER的含量及抗凋亡蛋白PI3K、p-Akt表达增高（P<0.05），促凋亡蛋白Caspase-3表达减少（P<0.05），G-L组、G-H组上述指标均有所改善（P<0.05），但G-H组明显优于G-L组（P<0.05）。HE染色及透射电镜形态学观察提示Hys组大鼠子宫平滑肌增厚，细胞边界不清晰，细胞核固缩呈椭圆形或畸形，胞质内线粒体肿胀，部分嵴断裂消失，可见粗面内质网扩张，肌纤维排列紊乱无序，可见明显炎性细胞浸润;G-L组子宫平滑肌细胞排列较Hys组有序，平滑肌层仍有所增厚，炎性细胞浸润亦较Hys组组减少，细胞核较Hys组稍增大，线粒体肿胀和粗面内质网扩张减少;G-H组子宫平滑肌细胞排列较Hys组明显有序、紧密，仅见轻微炎性细胞浸润，平滑肌层无明显增生，且平滑肌细胞核较正常，线粒体及粗面内质网形态接近正常。结论：桂枝茯苓丸有效改善子宫肌瘤模型大鼠的形态学指标，其机制可能与激活PI3K/AKT通路，下调E2、P、ER的表达，上调Caspase-3的表达有关。

关键词 桂枝茯苓丸;大鼠;子宫肌瘤;雌二醇;孕酮;雌激素受体;PI3K/Akt;作用机制

Study on the Mechanism of Guizhi Fuling Pill on Uterine Leiomyoma in Rats

YAO Qi1，GUO Hui1，CHEN Lingling1，CHEN Xiuping1，LIN Dongmei1，CHEN Shanyuan2

（1 Fuzhou Second Hospital Affiliated to Xiamen University，Fuzhou 350007，China; 2 Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122，China）

Abstract Objective：To explore the mechanism of Guizhi Fuling Pill in the treatment of uterine leiomyoma model rats.Methods：A total of 60 adult female SD rats were randomly divided into 4 groups：a blank （Control） group （n=15），a model （Hys） group （n=15），a low dose Guizhi Fuling pill （G-L） group （n=15） and a high dose Guizhi Fuling Pill （G-H） group （n=15）.Except for the sham operation group，the other 3 groups were modeled by uterine leiomyoma.G-L group and G-H group received 1.32 g/mL and 2.64 g/mL Guizhi Fuling Pill suspension 1 mL respectively，and the rats in the control group and Hys group were given the same dose of normal saline once a day for 8 weeks.The coefficients of uterus and ovary were recorded，the morphological changes of uterus were observed by HE staining，the ultrastructural changes of uterus were observed by transmission electron microscope，the contents of E2，P and ER in uterine tissue were detected by ELISA method，and the expression of PI3K/Akt signal pathway protein in uterine tissue was detected by Western Blot method.Results：Compared with Control group，the coefficient of uterus and ovary，the content of E2，P，ER and the expression of anti-apoptotic protein PI3K and p-Akt increased （P<0.05） and the expression of pro-apoptotic protein Caspase-3 decreased （P<0.05） in Hys group.The above-mentioned indexes were improved in G-L group and G-H group （P<0.05），but the expression of anti-apoptotic protein PI3K and p-Akt in G-H group was significantly better than that in G-L group （P<0.05）.The morphological observation of HE staining and transmission electron microscope showed that the uterine smooth muscle of Hys group thickened，the cell boundary was not clear，the nuclear pyknosis was oval or abnormal，the mitochondria in the cytoplasm swelled，part of the crest ruptured and disappeared，the rough endoplasmic reticulum dilated，the muscle fibers were disordered，and obvious inflammatory cell infiltration could be seen.The arrangement of uterine smooth muscle cells in G-Lgroup was more orderly than that in Hys group，the smooth muscle layer was still thicker，the infiltration of inflammatory cells was less than that in Hys group，the nucleus was slightly larger，and the swelling of mitochondria and dilatation of rough endoplasmic reticulum in G-L group were less than those in Hys group.The arrangement of uterine smooth muscle cells in G-H group was more orderly and compact than that in Hys group，only slight inflammatory cell infiltration，no obvious proliferation of smooth muscle layer，normal smooth muscle nucleus，mitochondria and rough endoplasmic reticulum were close to normal.Conclusion：Guizhi Fuling Pill can effectively improve the morphological indexes of uterine leiomyoma model rats，and its mechanism may be related to the activation of PI3K/AKT pathway，down-regulation of E2，P，ER expression and up-regulation of Caspase-3 expression.

Keywords Guizhi Fuling Pill; Rat; Hysteromyoma; Estradiol （E2）; Progesterone （P）; Estrogen receptor （ER）; PI3K/Akt; Mechanism

中圖分类号：R285.5;R273;R289.5文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.24.006

子宫肌瘤是好发于30～50岁女性[1]，且因子宫平滑肌增生形成的常见性激素依赖性良性肿瘤[2]，临床表现以下腹部疼痛和阴道异常出血为主，其发病机制尚不明确[3-4]，目前有研究人员推测可能与遗传因素，未分化成熟的子宫肌细胞突变，及局部雌、孕激素的水平等因素密切相关[5-6]。我们通过对近10年的文献梳理，打破了细胞过度凋亡现象仅存于恶性肿瘤的传统认知，发现子宫肌瘤等良性妇科肿瘤的发生发展与细胞过度凋亡亦存在密不可分的关系[7-11]。PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇3-激酶（PI3Ks）信号参与增殖、分化、凋亡和葡萄糖转运等多种细胞功能的调节;有研究显示子宫肌瘤平滑肌细胞数量增减不仅与细胞增殖旺盛程度有关，也与细胞凋亡速度有关[12]。

在中医学中，子宫肌瘤属于“癥瘕”“积聚”的范畴，癥瘕的形成因脏腑血气虚弱，外邪乘虚而入，正邪相搏结于下焦，久留不去，而成气滞、血瘀和痰浊之邪胶结不解，变生而成气滞、血瘀和痰浊之邪胶结不解，变生而成癥瘕，一下腹部的肿块，或胀痛为主症，伴有寒热不欲食、腰胁酸痛、水肿等全身证候。癥瘕的治疗原则是留者攻之，且切不可攻伐太过。桂枝茯苓丸首载于张仲景《金匮要略》：“妇人宿有癥病，经断未及三月，而得漏下不止，胎动在脐上者，为癥痼害。妊娠六月动者，前三月经水利时，胎也。下血者，后断三月血不也。所以血不止者，其瘕不去故也，当下其癥，桂枝茯苓丸主之”。该方由桂枝、茯苓、桃仁、牡丹皮、芍药等5味药组成，具有和缓化癥而不伤胎的特点。现代研究表明桂枝茯苓丸治疗子宫肌瘤的机制可能与抑制纤维结缔组织增生、降低雌激素和孕激素及其受体水平等相关[13]。笔者通过多年的临床工作经验明确桂枝茯苓丸对子宫肌瘤的疗效，现以子宫肌瘤模型大鼠为研究对象，探讨桂枝茯苓丸抑制子宫肌瘤的可能生物学机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 购买60只平均体质量为（230±20）g的SPF级健康成年雌性SD鼠，所有大鼠均购自上海SLAC实验动物有限责任公司，（合格证号：SCXK（沪）2017-0001）。所有大鼠购买后均饲养于厦门大学实验动物中心，进行为期7 d的适应性喂养。饲养环境：温度（23±0.5）℃，湿度（50±1）%，12 h/12 h昼夜交替，自由摄食、饮水。本研究方案经厦门大学动物管理委员会批准通过（28932-005），实验过程严格按照国际条例进行。

1.1.2 药物 桂枝茯苓丸（山西华康药业股份有限公司，批号：392839），苯甲酸雌二醇注射液（上海通用药业股份有限公司，批号：321201），黄体酮注射液（广州白云山明兴制药有限公司，批号：434-9）。

1.1.3 试剂与仪器 PMSF（碧云天公司，批号：232-01），SDS-PAGE电泳胶（碧云天公司，批号：65443），BCA工作液（碧云天公司，批号：293-07），PI3K（CST公司，美国，货号：s039023）、Akt（CST公司，美国，货号：s19203）、p-Akt（CST公司，美国，货号：t493291）、Caspase-3 p-Akt（CST公司，美国，货号：s38432）及β-actin p-Akt（CST公司，美国，货号：s07382）一抗和碱性磷酸酶标记山羊抗兔（CST公司，美国，货号：392032），SDS-PAGE电泳胶（碧云天公司，货号：34332），BCA工作液（碧云天公司，货号：3920-3），E2 ELISA试剂盒（Promega公司，美国，货号：66435）、P ELISA试剂盒（Promega公司，美国，货号：24934）、ER ELISA试剂盒（Promega公司，美国，货号：29321）。

高速冷冻离心机[Thermo Fisher公司，美国，型号TGL-20M/18M（S）]，切片机（Leica公司，德国，型号：RM2235），普通光学显微镜（Leica公司，德国，型号：DCM8），酶标仪（Leica公司，德国，型号：9602），电泳槽（Bio-rad公司，美国，型号：3923-K），转膜仪（Bio-rad公司，美国，型号：390-Q2），透射电子显微镜（JEOL公司，日本，型号：EM-2100PlusJEM-2100Plus），凝胶成像系统（Bio-rad公司，美国，型号：GelDoc 2000）。

1.2 方法

1.2.1 分组与模型制备 1）分组：60只雌性SD大鼠按照随机数字表法随机分为空白（Control）组、模型（Hys）组、桂枝茯苓丸低剂量（G-L）组、桂枝茯苓丸高剂量（G-H）组，每组15只。

2）模型制备：除假手术组外，其余3组均给予苯甲酸雌二醇注射液（0.50 mg/kg）肌内注射，3次/周，共12周;随后肌内注射黄体酮注射液（5 mg/kg），2次/周，共4周，建立子宫肌瘤模型。空白对照组在相同时间给予等量生理盐水。

1.2.2 干预方法 第17周开始药物干预，根据《实验动物学》[14]中人和动物药物间按体表面积折算的等效剂量换算公式，以成人临床用药剂量计算动物用药剂量，计算得出G-L组、G-H组分别接受浓度为1.32 g/mL、2.64 g/mL的桂枝茯苓丸混悬液1 mL灌胃，其中空白组及模型组大鼠接受等剂量生理盐水灌胃，1次/d，连续8周。

1.2.3 检测指标与方法

1.2.3.1 子宫与卵巢系数 各组大鼠常规麻醉处死后，解剖取出子宫和卵巢组织，小心剔除组织表面脂肪和其他组织，分别称取子宫和卵巢湿重，计算子宫和卵巢系数。子宫系数=子宫湿重/大鼠体质量（取材时）×100%;卵巢系数=卵巢湿重/大鼠体质量（取材时）×100%。

1.2.3.2 子宫形态学观察 取子宫分角上病理改变较典型部位的组织，进行常规甲醇固定、脱水、石蜡包埋、切片，进行苏木精-伊红（HE）染色，于光学显微镜下观察观察子宫平滑肌细胞的细胞排列、体积及数量等形态变化，观察是否有炎性浸润等。

1.2.3.3 子宫超微结构观察 取子宫分角上病理改变较典型部位的组织在3%戊二醛固定液中，并迅速将其修剪成2 mm×2 mm的小方块，后经3%戊二醛/1.5%多聚甲醛前固定4 h（4 ℃），l%锇酸/1.5%亚铁氰化钾后固定2 h，经0.1 mol/LPBS冲洗3次后，进行脱水、包埋、固化、切片，透射电镜下观察各组子宫肌瘤细胞超微结构的改变。

1.2.3.4 雌二醇、孕酮、雌激素受体含量检测 采用双抗体/夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测子宫组织均浆中雌二醇（E2）、孕酮（P）、雌激素受体（ER）的含量，实验过程严格按照各指标ELISA试剂盒说明书进行，酶标仪读取结果并统计分析。

1.2.3.5 PI3K/Akt信号通路蛋白表达的检测 以1 mL裂解缓冲液裂解200 mg子宫组织，离心，取上清液。BCA法测蛋白浓度，蛋白变性。按等量蛋白（50 μg）上样至SDS-PAGE凝胶，电泳（5%浓缩胶，12%分离胶，60 V，40 mA，2.5 h），转膜（100 V，250 mA），时间依据各指标分子量大小而定。5%脱脂奶粉封闭2 h后，分别加入抗PI3K、Akt、p-Akt、Caspase-3及β-actin（1∶5 000）一抗抗体孵育，将靶PVDF膜放于摇床上孵育，并置于4 ℃环境中过夜。次日将辣根过氧化酶标记的二抗按照1∶1 000的浓度加入靶PVDF膜，室温下孵育50 min后取出PVDF膜，用TBST清洗3次后将其置于扫描仪上，滴加ECL显色液，避光反应1 min后进行曝光显影，利用生物图像分析系统对所得图像进行分析处理。

1.3 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件进行数据分析，计数资料用均数±标准差（±s）表示，其中符合正态分布的数据采用单因素方差分析，不符合正态分布的数据利用非参数检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组子宫与卵巢系数的比较 与Control组比较，Hys组、G-L组、G-H组的的子宫系数、卵巢系数均明显增加（P<0.05）;G-L组和G-H组较Hys组均明显下调（P<0.05），其中G-H组下调程度优于G-L组（P<0.05）。见表1。

2.2 各组子宫形态学的变化 各组大鼠子宫组织HE染色显示：Control组大鼠子宫平滑细胞排列整齐、紧密，形态正常，色泽均一，肌层未见炎性细胞浸润，未出现增生;Hys组大鼠子宫平滑肌增厚，细胞边界不清晰，细胞核呈现扁圆形状，肌纤维排列紊乱无序，可见明显炎性细胞浸润;G-L组子宫平滑肌细胞排列较Hys组有序，平滑肌层仍有所增厚，炎性细胞浸润亦较Hys组组减少;G-H组子宫平滑肌细胞排列较Hys组明显有序、紧密，见轻微炎性细胞浸润，平滑肌层无明显增生。见图1。

2.3 各组子宫超微结构的情况 各组大鼠子宫组织电镜下观察结果显示：Control组大鼠子宫平滑肌细胞核大小、形态正常，胞质中细胞器正常，细胞周围胶纤维排列规则;Hys组子宫平滑肌细胞核固缩呈椭圆形或畸形，胞质内线粒体肿胀，部分嵴断裂消失，可见粗面内质网扩张，且局部有大量溶酶体聚集，细胞内含有较丰富的肌微丝，并见脂褐素;G-L组子宫平滑肌细胞核较Hys组稍增大，见部分线粒体肿胀和粗面内质网扩张;G-L组子宫平滑肌细胞核较正常，线粒体及粗面内质网形态接近正常。见图2。

2.4 各组子宫E2、P、ER含量的比较 与Control组比较，Hys组、G-L组、G-H组的子宫组织中E2、P和ER表达水平均明显上调（P<0.05）;G-L组和G-H组较Hys组均明显下调（P<0.05），其中G-H组下调程度优于G-L组（P<0.05）。见表2。

2.5 各组子宫PI3K/Akt信号通路关键分子蛋白表达的比较 与Control组比较，Hys组、G-L组、G-H组的子宫组织中PI3K、p-Akt蛋白表达水平均明显上调（P<0.05），G-L组和G-H组的PI3K、p-Akt蛋白表达较Hys组均明显下调（P<0.05），其中G-H组下调程度大于G-L组（P<0.05）;与Control组比较，Hys组、G-L组、G-H组的子宫组织中Caspase-3蛋白表达水平均明显下降（P<0.05），G-L组和G-H组的表达较Hys组均明显增多（P<0.05），其中G-H组上升程度大于G-L组（P<0.05）。见图3，表3。

3 讨论

3.1 桂枝茯苓丸对子宫形态学的影响 桂枝茯苓丸现常用于治疗子宫肌瘤，《金匮要略·妇女妊娠病》有云：妇人宿有癥病……桂枝茯苓丸主之。凡癥之初必因寒，其中桂枝与芍药一阴一阳，谓之于阴中宣阳以调理阴阳而消其寒，癥之成，必挟湿热而自成窠囊，牡丹皮性寒，与桂枝寒温相济，宣通血中热结，茯苓渗湿与牡丹皮一气一血，以调寒温而扶正气，桃仁善于破恶血，消癥痼，有病则病受之，则不伤胎血也，是故养正即所以去邪也。“丸者缓也”，桂枝茯苓丸在用法上“炼蜜和丸，如兔屎大”，使用的药量小，又加以蜂蜜缓和药性，体现了妊娠之体虽消除癥病，法当缓图的原则，令药适以胜病，而不害胎。临床上使用桂枝茯苓丸来治疗子宫肌瘤的研究屡见不鲜，周琼[15]采用高强度聚焦超声结合桂枝茯苓丸口服治疗子宫肌瘤短期临床有效率达93.67%，同时表明其能更快的改善临床症状，缩小肌瘤的体积;林景美等[16]选择桂枝茯苓丸與米非司酮治疗子宫肌瘤，改善了子宫体积，并减少了最大肌瘤的体积，使治疗有效率达到93.94%。本研究通过HE染色和透射电镜形态学观察桂枝茯苓丸治疗子宫肌瘤模型大鼠，结果显示Hys组大鼠的子宫平滑肌出现增厚，细胞边界模糊，细胞核畸形，胞质内线粒体部分嵴出现断裂消失，可见粗面内质网扩张，肌纤维的排列无序，提示明显的炎性细胞浸润;G-L组的子宫平滑肌细胞排列就较Hys组有序，平滑肌层虽仍有所增厚，但炎性细胞浸润明显减少，细胞核也较Hys组增大，线粒体和粗面内质网扩张减少;G-H组的子宫平滑肌细胞则排列较Hys组更为紧密有序，平滑肌层未见明显的增生，仅可见轻微的炎性细胞浸润，细胞核也较正常，线粒体和粗面内质网的形态与正常形态类似。提示桂枝茯苓丸治疗子宫肌瘤模型大鼠有效改善其病理形态。

3.2 基于PI3K/AKT通路探討桂枝茯苓丸的作用机制 子宫肌瘤在青春期前较为少见，绝经后也逐步的萎缩或消退，更多是好发于育龄女性，这是因为出现外源性的雌激素刺激或妊娠时，子宫肌瘤会迅速增大，而低雌二醇状态则会导致子宫肌瘤缩小、甚至消失，说明子宫肌瘤与卵巢性激素水平密切，是一种激素依赖型肿瘤。研究表明雌孕激素在经过一系列反应，与细胞中ER、PR进行结合后才能具有生物学效应[17-18]。之前学者普遍认为E可以促进血管生成，并影响血管通透性，通过与ER的结合改变了细胞的形态，增加DNA的合成，从而为P、ER创造肌瘤增殖的环境，是子宫肌瘤发生与发展的重要促进因素。随着目前组织、生化和临床方面的研究进展，又有新的证据显示孕激素和雌激素在子宫肌瘤的生长中起着同等重要的作用。学者在使用抗P制剂治疗子宫肌瘤患者后，发现肌瘤体积出现明显的减小[19]。在子宫平滑肌瘤内，细胞有丝分裂活性于黄体期达到高峰，大剂量孕激素治疗增强其细胞核分裂活性，提示P有促进肌瘤细胞有丝分裂的作用，此外，P还具有激活细胞增生、分化、增殖的作用。本研究中结果显示与Control组比较，Hys组的子宫卵巢系数、E2、P、ER的表达增高，随着桂枝茯苓丸的干预，G-L组、G-H组上述指标均有所改善，且G-H组明显优于G-L组（P<0.05）。

ER作为一种受体，存在于细胞膜或细胞内，是一种能选择性与相应的递质、激素等相结合，并产生特定生理效应的大分子物质，其生物效应受诸多因素的影响，其中PI3K/AKT通路的激活情况与子宫肌瘤的发生、发展有着密切的关联。在P13K/AKT信号通路中，磷脂酰肌醇-3激酶（phosphoinositide 3 kinase，P13K）作为细胞内的第二信使，进一步活化下游的AKT，启动其对细胞凋亡因子Caspase-3的调控[20]。本研究结果显示，与Control组比较，Hys组的抗凋亡蛋白PI3K、p-Akt表达增高（P<0.05），促凋亡蛋白Caspase-3表达减少（P<0.05），随着桂枝茯苓丸的治疗，G-L组、G-H组上述指标均有所改善（P<0.05），但G-H组明显优于G-L组（P<0.05）。提示桂枝茯苓丸抗大鼠子宫肌瘤作用机制可能通过介导PI3K/AKT通路促进子宫肌瘤细胞凋亡实现。

3.3 细胞凋亡与子宫组织形态学 子宫肌瘤临床病理组织形态学主要表现为平滑肌细胞增多。以往研究认为，细胞数目增多主要是由细胞增殖引起的。目前已有研究证实，细胞数量增减不仅与细胞增殖的剧烈程度有关，也与细胞凋亡的速度有关;抑制细胞凋亡可延长细胞存活期，降低死亡率，间接增加细胞数量，间接促进细胞数目增多[21-22]。Caspase-3对细胞的增殖速度不产生影响，而是通过促进多种形式的细胞死亡，导致细胞数目减少，从而抑制子宫肌瘤的生长[23-24]。本实验模型动物子宫组织形态学观察显示，子宫平滑肌明显增厚，平滑肌细胞明显增多;HE染色在平滑肌层未观察到细胞凋亡，证实子宫肌瘤模型动物中细胞凋亡受抑制只发生在子宫平滑肌层。提示，细胞凋亡受抑制可能是促进子宫平滑肌细胞增多的机制之一。由于凋亡受抑制，细胞增殖与凋亡失衡，导致子宫平滑肌细胞增多。本研究通过桂枝茯苓丸治疗后，激活PI3K/AKT信号通过，促进Caspase-3的表达，促进细胞凋亡，打破了病理状态下细胞增殖与凋亡的失衡状态，抑制子宫平滑肌细胞的增殖，从而缩小子宫肌瘤。

参考文献

[1]Zhang Y，Gu X，Meng Y，et al.Analysis of the effect of laparoscopy and hysteroscopy on ovarian function，immune function and quality of sexual life of patients with hysteromyoma at different ages[J].Oncol Lett，2018，15（3）：2929-2934.

[2]Kazachkov EL，Voropaeva EE，Kazachkova EA，et al.[Endometrial morphological characteristics in patients with hysteromyoma and chronic endometritis in infertility][J].Arkh Patol，2019，81（6）：41-48.

[3]Li W，Hong B，Li Q，et al.An integrated serum and urinary metabonomic research of Rhizoma Curcumae-Rhizoma Sparganii drug pair in hysteromyoma rats based on UPLC-Q-TOF-MS analysis[J].J Ethnopharmacol，2019，231：374-385.

[4]Feofilova MA，Pavlov OG，Geimerling VE.The Effect of Life-Style and Occupational Hazards on Development of Hysteromyoma[J].Probl Sotsialnoi Gig Zdravookhranenniiai Istor Med，2018，26（6）：406-410.

[5]Lou R，Deng H.Effects of real-time CEUS on treatment of hysteromyoma with radiofrequency ablation and the evaluation on blood perfusion[J].Minerva Med，2020，2（27）：4806-4813.

[6]郑九波，李冬华，王亚松，等.子宫肌瘤的发病机制研究进展[J].现代中西医结合杂志，2012，21（29）：3298-3301.

[7]Li QQ，Wang G，Huang F，et al.Antineoplastic effect of beta-elemene on prostate cancer cells and other types of solid tumour cells[J].J Pharm Pharmacol，2010，62（8）：1018-1027.

[8]朱丽，贡子琦，张雨婷，等.细胞凋亡抑制在子宫肌瘤发病机制中的意义[J].实用临床医药杂志，2018，22（24）：58-61，65.

[9]高光玲，李杨，杜玲莉，等.去泛素化酶3在子宫肌瘤中的表达及对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡的影响[J].河北医药，2020，42（13）：1974-1978.

[10]朱丽.子宫肌瘤的发生與细胞凋亡间关系的研究进展[J].养生保健指南，2017，16（7）：278.

[11]陈超，李冬华，王满元，等.子宫肌瘤细胞凋亡机制及药物靶点治疗研究要点探析[J].医学研究杂志，2017，46（3）：8-10，17.

[12]徐晓丽.子宫肌瘤动物模型细胞凋亡及其调控因素的研究[D].北京：中国中医科学院，2006.

[13]陈智昌，潘春梅，郭虹.桂枝茯苓丸对子宫肌瘤模型大鼠的作用机制[J].世界中医药，2019，14（8）：2010-2013，2018.

[14]邹移梅，徐志伟，黄韧，等.实验动物学[M].北京：科学出版社，2018：345.

[15]周琼.桂枝茯苓丸加减联合高强度聚焦超声治疗子宫肌瘤效果研究[J].陕西中医，2020，41（6）：733-735.

[16]林景美，陈秋霞，刘英莲.米非司酮联合桂枝茯苓丸治疗无症状子宫肌瘤的临床观察[J].实用癌症杂志，2019，34（12）：2082-2085.

[17]唐孔珍，李伟英.米非司酮对子宫肌瘤组织中ER、PR及EGFR的影响及其临床机制[J].实用癌症杂志，2018，33（1）：33-35.

[18]刘冉，陶国伟，甄军晖，等.ER、PR在妊娠期子宫肌瘤组织中的表达及意义[J].山东大学学报：医学版，2016，54（5）：45-49.

[19]柯小平，李经维，李莉，等.PGE2/PGE2-R介导的RAS/ERK及PI3K/AKT信号途径与子宫肌瘤发病机制的研究[J].安徽医科大学学报，2019，54（5）：673-677.

[20]肖红妮，刘志杰.“三棱-莪术”组分配伍介导PI3K-AKT通路治疗大鼠子宫肌瘤的研究[J].世界中医药，2019，14（9）：2267-2271.

[21]朱丽，贡子琦，张雨婷，等.细胞凋亡抑制在子宫肌瘤发病机制中的意义[J].实用临床医药杂志，2018，22（24）：58-61，65.

[22]张志凌，张怡.子宫肌瘤中细胞增殖和凋亡的研究[J].中国现代医学杂志，2005，15（7）：969-972.

[23]王佳，梁葵香，刘艳妮，等.茯苓酸通过上调miR-133a影响子宫肌瘤细胞增殖凋亡及表皮生长因子的水平[J].中国免疫学杂志，2020，36（9）：1069-1074.

[24]李锐，闻春艳，马洪喜.Caspase-3和Survivin蛋白在复发子宫肌瘤患者血清及肌瘤组织中的表达及临床意义[J].中国实验诊断学，2014，18（6）：1019-1020.

（2020-08-02收稿 责任编辑：苍宁）

基金项目：国家自然科学基金项目（81804228）;福建省卫生计生委中医科研项目（WZY0939）作者简介：姚祺（1983.12—），女，硕士，主治医师，研究方向：妇科内分泌及不孕症中西医结合诊疗，妇科疾病微创治疗，E-mail：yaoqi1215@163.com通信作者：陈山源（1984.08—），男，硕士，讲师，研究方向：内科疾病的中医诊疗，E-mail：32077069@qq.com