王署美 王 琳 王 硕 李万忠 李海健 吕艳娜 赵春贞

二氢杨梅素(dihydromyricetin，DHM)是一种存在于天然植物中的多酚羟基双氢黄酮类化合物，广泛存在于葡萄科属植物，其药理作用广泛。研究发现，二氢杨梅素具有调节血脂、保护神经系统、保护心血管、抗炎等多种药理作用，可改善阿尔茨海默病大鼠的认知功能[1～4]。目前二氢杨梅素对于H2O2诱导的PC12细胞损伤的作用尚未见报道。本研究利用H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤模型，探讨二氢杨梅素的作用效果及机制。

材料与方法

1.细胞及培养:大鼠高分化嗜铬瘤细胞PC12细胞株购自中国科学院上海细胞库，细胞采用高糖DMEM培养液，加10%的胎牛血清，于37℃、5% CO2条件下常规培养。

2.主要试剂：二氢杨梅素(DHM，HPLC≥98%)购自美国Sigma-Aldrich公司；高糖DMEM培养液购自美国Hyclone公司；胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司；噻唑蓝购自美国Sigma-Aldrich公司；乳酸脱氢酶试剂盒购自南京建成生物工程研究所；Hoechst 33342购自美国Sigma-Aldrich公司；Bax、Bcl-2和caspase-3兔多克隆抗体，GAPDH小鼠多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，抗兔IRdye700及抗鼠IRdye800荧光标记的二抗购自美国LI-COR公司。

3.细胞分组及干预:细胞随机分组，分为正常对照组、模型组(100μmol/L H2O2)、DHM低剂量组(10μmol/L DHM+100μmol/L H2O2)、DHM低剂量组(20μmol/L DHM+100μmol/L H2O2)、DHM低剂量组(40μmol/L DHM+100μmol/L H2O2)。PC12细胞采用DHM干预0.5h后，给予H2O2进行处理，24h后进行相关指标检测。

4.细胞活性检测:取对数生长期的PC12细胞，以5×105个/毫升接种于96孔培养板，每孔加入100μl细胞悬液，二氧化碳孵箱中培养24h后，加入终浓度10、20、40μmol/L的DHM溶液作用0.5h后，加100μmol/L的H2O2溶液继续培养24h。避光加入终浓度为0.5mg/ml的MTT溶液，37℃孵育4h后，加入100μl的DMSO，震荡10min使结晶充分溶解，于酶标仪检测570nm波长处的A值，计算细胞存活率，实验平行重复3次。……