李旭东 张平 王文忠

【摘要】 目的：連续灌胃SD大鼠90天水飞蓟提取物， 研究水飞蓟提取物对SD大鼠的长期毒性情况，以了解水飞蓟提取物长期服用的安全性。方法：选用雌雄各半的SD 大鼠，随机分为对照组和水飞蓟提取物低、中、高（0.083 g/kg、0.167g/kg 和 0.333g/kg ）三个剂量组，连续灌胃 90 d，以 SD 大鼠的体重、摄食量、食物利用率、血液生化指数及脏器系数检查等作为检查指标，全面评价连续灌服水飞蓟提取物对大鼠的毒性作用。结果：受试动物一般情况良好，试验结束时雌雄大鼠体重、总增重、总摄食量及总食物利用率与对照组比较均无显著性差异（P>0.05）;脏器重量、脏器系数均无异常改变;眼部检查未发现异常变化;尿液指标、血液学指标及生化指标结果显示，各项指标均在正常范围;各脏器病理组织学检查均未见与受试样品有关的病理改变（P>0.05）。结论：水飞蓟提取物连续灌服90天对 SD 大鼠无不良影响，提示其长期服用具有安全性。

关键词：水飞蓟提取物;大鼠;长期毒性

水飞蓟（silybum marianum L.Gaertn）是欧洲民间的一种草药，用于治疗肝胆疾病。我国直到20世纪60年代末以H.Wagner 为代表的德国药学家，对其有效成分进行提取后， 我国才将它作为一种保肝药用植物推广种植。水飞蓟主要有效物质为水飞蓟素，研究指出水飞蓟素主要成分有水飞蓟宾 （silybin）、异水飞蓟宾（isosilybin）、水飞蓟亭（silychristin）等[1-2]。 其中，以水飞蓟宾含量最高，活性也最强，它具有一定保肝作用[3-5]。水飞蓟素在临床应用以来，因其高效、低毒和良好的耐受性，已被广泛应用。但国内有关水飞蓟长期服用安全性的报道较少，因此本试验通过动物实验，连续灌胃SD大鼠90天水飞蓟提取物，观察水飞蓟提取物连续灌胃对大鼠的长期毒性，评价水飞蓟提取物长期服用的安全性。

1材料与方法

1.1试验药物

水飞蓟提取物，为实验室自提，水飞蓟经研磨辗压、提取（90%乙醇提取3次）、过滤、浓缩、萃取、干燥等主要工艺加工制成的黄色粉末，人体推荐剂量为0.2g/d。

1.2实验动物

清洁级SD大鼠80只，体重在60g～80g，平均分为4组，每组动物20只，雌雄各半。组内动物个体体重相差不超过平均体重的10%， 组间平均体重相差不超过5%。

1.3 剂量选择及分组

试验设3个剂量组和一个对照组，剂量组按照人体推荐服用量的25、50、100设计，分别为0.083 g/kg、0.167g/kg 和 0.333g/kg ，用蒸馏水配置成一定浓度的受试物液，对照组给予等体积的蒸馏水，每日灌胃一次（ 1.0 ml/100 g·bw） 。

1.4 方法及时间

采用经口染毒，每日灌胃一次，连续90d。每天观察并记录动物的一般表现、行为、中毒表现和死亡情况。每周称1次体重和2次食物摄入量。 计算动物增重、摄食量、食物利用率等，在试验前和试验结束时，至少对高剂量组和对照组大鼠进行眼部检查。若发现高剂量组动物有眼部变化，则应对所有动物进行检查。 测定血常规、生化等血液学指标。大鼠在试验结束时进行尿液常规检查，实验结束将动物处死并进行大体解剖，肉眼观察有无异常，称量并计算脏体比值，进行主要组织病理学检查。

1.5 数据处理  采用SPSS11.0统计软件对数据分别进行One-way ANOVA分析及Dunnett检验，检验水准α=0.05。

2结果

2.1 一般情况观察  各组动物生长发育、活动均正常，大鼠毛发光润，摄食、饮水、粪便均正常。无中毒表现和死亡。

2.2 对大鼠体重、增重及食物利用率的影响  以0.083 g/kg、0.167g/kg 和 0.333g/kg 三个剂量的水飞蓟提取物经灌胃给予大鼠，连续90天。与阴性对照组相比，各剂量组动物每周体重、体重增加量、进食量和食物利用率均无统计学差异（P>0.05）。90天喂养结束时，与阴性对照组相比各剂量组动物总体重增加量、总进食量和总食物利用率均无统计学差异（P>0.05）。结果见表1，2。

2.3眼部检查

在试验前和试验结束时，对高剂量组和对照组大鼠进行眼部检查。未发现高剂量组和对照组动物有眼部异常变化。

2.4大鼠尿常规指标

经口给予大鼠不同剂量的水飞蓟提取物90天，测定大鼠尿常规指标。结果各剂量组尿常规指标与阴性对照组相比，均无统计学差异（P>0.05）。

2.5 大鼠血液学指标

经口给予大鼠不同剂量的水飞蓟提取物90天，测定各剂量组大鼠血液红细胞计数、血红蛋白水平、白细胞计数及其分类等指标、红细胞压积、血小板计数等指标。结果各剂量组的各指标与阴性对照组相比，均无统计学差异（P>0.05），结果见表3。

2.6 大鼠血液生化指标

经口给予大鼠不同剂量的水飞蓟提取物90天，测定各剂量组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、谷氨酰转肽酶、尿素、肌酐、血糖、总蛋白、白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、氯、钾、钠的水平。结果各剂量组的各指标与阴性对照组相比，均无统计学差异（P>0.05），结果见表4。

2.7 大体病理及组织学检查

经口给予大鼠不同剂量的水飞蓟提取物90天，测定各组大鼠心脏、胸腺、肾上腺、肝脏、肾脏、脾脏、睾丸、卵巢绝对重量及相对重量（脏/体）。结果各剂量组的各指标与阴性对照组相比，均无统计学差异（P>0.05）。各剂量组雌雄大鼠大体解剖观察均未见异常改变。大体解剖观察未发现与受试样品有关的组织病理学改变。

3结论

水飞蓟已经被应用于保健食品原料，其保肝作用显著，具有广阔的市场前景。水飞蓟提取物为水飞蓟经一定工艺提取得到的固体粉末，有效成分为水飞蓟宾，近几年来逐渐被用作保健食品原料开发。有研究指出水飞蓟提取物对孕鼠生长和胚胎发育无不良影响，无致畸作用[6]。水飞蓟提取物对雌、雄昆明种小鼠的最大耐受剂量（MTD）均大于20.0g/kg·bw，属无毒级;遗传试验中Ames试验、骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验结果均为阴性[7]。

本研究针对水飞蓟提取物长期食用安全性进行了研究，采用SD大鼠进行试验。本试验水飞蓟提取物以0.083g/kg·bw/d、0.167g/kg·bw/d、0.333g/kg·bw/d的剂量给予大鼠90天，受试动物一般情况良好，试验结束时雌雄大鼠体重、总增重、总摄食量及总食物利用率与对照组比较均无显著性差异（P>0.05）;脏器重量、脏器系数均无异常改变;眼部检查未发现异常变化;尿液指标、血液学指标及生化指标结果显示，各项指标均在正常范围;各脏器病理组织学检查均未见与受试样品有关的病理改变。表明水飞蓟提取物连续灌服90天对 SD 大鼠无不良影响。为水飞蓟提取物应用于保健食品原料安全性提供了依据。

参考文献

[1] 柯铭清.中草药有效成分理化与药理特性[M].长沙：湖南科学技术出版社，1982：266.

[2] 闫玉峰，于建东.水飞蓟化学成分及药理研究进展[J].中国药事，2000，14（5）： 335～337.

[3] 高华武，陈明，龍子江，等.水飞蓟宾对高脂诱导非酒精性脂肪肝大鼠的调脂保肝作用[J].药物评价研究，2017，40（06）：773-777.

[4] 郅敏，姚嘉茵，鲁义，等.水飞蓟宾治疗非酒精性脂肪性肝病的实验研究[J].新医学，2010，41（10）：647-652+701.

[5]李巍，董晓彤，傅华，等.水飞蓟宾胶囊对行肝切除术后患者肝脏保护作用的临床评价[J].中国医院药学杂志，2017，37（10）：980-983.

[6] 李褔安，范雪丽，范文今.水飞蓟提取物对孕鼠生长和胚胎致畸影响的研究.中国卫生检验杂志，2015，25 （19）：3256-3258.

[7]黄凰，张莹莹，胡余明，等.水飞蓟提取物的急性毒性、遗传毒性和亚慢性毒性研究.实用预防医学，2016，23（1）：103-105，114.