王 俊,王 宇,2,彭柿杰,冯 涛,唐卫东

1.攀枝花学院附属医院检验科,四川攀枝花 617000；2.攀枝花学院医学院,四川攀枝花 617000

真菌性角膜炎是由各种真菌引起的角膜病变,早期诊断困难,严重者可致盲[1]。快速诊断真菌性角膜炎有助于临床的诊治,以及患者眼球和视力的恢复。本研究通过比较革兰染色镜检、真菌培养和聚合酶链反应(PCR)3种检测方法在诊断真菌性角膜炎中的优缺点,探讨PCR检测技术在真菌性角膜炎的快速诊断中的应用价值,现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集攀枝花学院附属医院2016年1月至2018年12月收治的502例疑似感染性角膜炎的患者为研究对象,其中男320例,女182例；年龄1～87岁,平均(53.36±18.56)岁。

1.2仪器与试剂 革兰染液和乳酸酚棉兰染液均购自珠海贝索生物技术有限公司；沙保罗平板购自郑州安图生物有限公司；实时荧光定量PCR仪、电泳仪和凝胶电泳成像系统购自美国伯乐生命医学产品有限公司；核酸提取试剂盒购自广东凯普生物科技股份有限公司；PCR引物的合成和测序均由苏州金唯智公司完成。

1.3方法 眼科医生根据患者临床症状和病史,进一步做裂隙灯和激光共焦显微镜检查,对出现角膜溃疡患者刮取角膜分泌物分别做革兰染色镜检、真菌培养和PCR检测。

1.3.1革兰染色镜检 由眼科医生无菌操作刮取患者角膜病变部位组织,制成涂片,自然干燥后火焰固定,然后进行革兰染色,最后采用油镜进行镜检。

1.3.2真菌培养 取涂片的同时,将角膜分泌物分别接种于两块沙保罗平板,分别放置于28 ℃和35 ℃培养箱中培养7 d,每天观察,长出可疑菌落进一步做乳酸酚棉兰染色鉴定。……