姚长风，刘自兵，唐 巍，张 燕，刘存斌，汪宗宝，李斯亮

(安徽中医药大学针灸推拿学院，安徽 合肥 230012)

骨代谢性疾病是临床常见疾病，其中以骨质疏松症的危害性最大。在我国中老年人群中，骨质疏松症女性患者多见。艾灸等中医药疗法是目前临床治疗骨质疏松症的较好方法[1-2]，且不良反应不明显，因而日益受到人们的重视。既往研究[3-4]发现，艾灸关元、三阴交可以有效提高去卵巢大鼠的骨密度，提高血清中雌二醇含量，亦可以有效提高女性患者血清中雌二醇含量，但其内在机制尚未明确。不少学者指出，骨改建的失衡是骨质疏松症发生的根本原因，作为成骨细胞前体细胞的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCs)在改建过程中具有重要作用。有学者认为，Wnt/β-catenin信号通路是BMMSCs分化为成骨细胞过程中的重要信号通路。因而本研究在既往研究的基础上，以经典的去卵巢大鼠骨质疏松症模型为研究对象，利用现代细胞分子生物学技术，观察艾灸三阴交、关元穴对去卵巢大鼠BMMSCs中Wnt/β-catenin信号通路的影响，探究艾灸影响骨代谢的内在机制。

1 材料

1.1 实验动物 6月龄SPF级SD雌性大鼠60只，体质量(310±10)g，由安徽医科大学实验动物中心[生产许可证号：SCXK(皖)2011-0002]提供。

1.2 主要试剂及仪器 MTT(BS0328)：北京绿生源科技有限公司；骨钙素(bone glaprotein,BGP)、酶联免疫吸附试验试剂盒(20160110、20160108)：上海源叶生物科技有限公司；实时荧光定量聚合酶链式反应仪(PIKOREAL 96)、逆转录试剂盒(00287813)：Thermo；β-连环蛋白(β-catenin)(GR177612-31)：Abcam；TCF-4(7)：CST；一抗Wnt3a(150604)、Dkk1(AF02158945)：Bioss。

2 方法

2.1 动物模型复制、分组和干预 采用随机数字表法将60只大鼠随机分为正常组(20只)和去卵巢组(40只)。……