刘俊，刘芳，郑洪

（武汉市汉阳医院输血科，湖北 武汉）

0 引言

准确的交叉配血是临床安全输血的重要保障，但是由于疾病的影响，血清学抗原抗体的复杂性，冷凝集素、自身抗体、同种抗体的存在，给交叉配血、血型鉴定带来困扰，导致输血困难。因此输血实验室要根据临床资料，对有疑问的病例进行补充试验，并对检测结果并进行正确分析，确保输血的安全。Rh 血型系统包括D、C、c、E 和e5 种主要血型抗原。RhD 血型是临床输血前常规检测项目，而其他4 种血型抗原在临床并未常规检测。许多试验结果提示，由于输血或妊娠原因而产生的红细胞同种抗体大多为抗Rh 系统抗体，且多为IgG 型，虽然有天然的IgM 型抗C、抗E 抗体，但多数是有抗原刺激产生的IgG 型，D抗原目前是临床常测抗原，患者产生抗D 抗体机会不大，但C、c、E、e 抗原在临床并未常规检测，极易因血型抗原不合而使患者产生抗体，当患者再次暴露于某种致敏性Rh 血型抗原时，受者免疫系统回忆反应可迅速产生大量抗体，引起严重的输血不良反应。本文患者Rh 分型为DCe，部分地区统计只占人群的2%或更低，而C、E 抗原分布频率高，患者很容易接触到C、E 抗原，从而产生抗体。

1 临床资料

1.1 病例介绍

患者，女，50 岁，平素健康情况差，于2018 年8 月10 号因间断发热咳嗽咳痰4 天入院。患者有高血压病史10 余年，最高180/100，长期口服降压药物治疗，今年出现血压偏低，自行停用降压药，有心衰病史，在我院心内科治疗后好转出院。有慢性胃炎病史，及反复消化道出血史，有肾功能不全、尿毒症、慢性肾性贫血病史7 年，目前在我院进行维持性血液透析3 次/周并间断输血，最后一次输血时间为2018 年3 月。患者否认糖尿病、冠心病史，否认药物食物过敏史。入院诊断：①发热 肺部感染；②慢性肾衰竭肾性贫血；③高血压Ⅲ级 。

1.2 材料

抗A 抗B 标准血清（单克隆抗体）由长春博德生物技术有限责任公司提供，用于鉴定病人的血型；凝聚胺介质试剂由珠海贝索生物技术有限公司提供，用于特殊介质交叉配血试验；Rh（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）由上海血液生物医药有限责任公司提供，用于鉴定病人Rh 血型；ABO 血型反定型试剂盒（人血红细胞）由长春博迅生物技术有限责任公司提供，用于添加反定型细胞；不规则抗体检测试剂（人血红细胞）由长春博迅生物技术有限责任公司提供，用于鉴定病人不规则抗体筛选试验；抗人球蛋白检测卡由长春博迅生物技术有限责任公司提供，用于鉴定直接抗人球蛋白试验；Rh 血型抗原检测卡（单克隆抗体）由长春博迅生物技术有限责任公司提供，用于鉴定病人Rh血型。

1.3 临床分析及输血处理

试验结果

患者于本科检查血型为O 型Rh 阳性，不规则抗体筛查为Ⅱ、Ⅲ阳性（+）；

病人血色素低，医生建议输血治疗，由于不规则抗体阳性故送血站进行筛血试验；

血型单特异性抗体鉴定：患者检出E 抗体，但不排除自身抗体；

其它结果 自身阳性，建议输注洗涤红细胞（盐水法、微柱凝胶法）；

Rh 血型抗原检测结果：

序号 -D -C -c -E -e 表型病人 + + - - + R1R2 DCe/DCe

血交叉（凝聚胺）主侧、次侧无凝集无溶血；

血交叉（微柱凝胶法）主侧无凝集无溶血，次侧有凝集无溶血。

1.4 方法

血型、血清学等免疫技术及配血操作按说明书操作：

血型操作ABO、RhD 血型定型检测卡，选择瑞士HamiltonB AG 全自动血型分析仪“血型定型检测”项目进行操作。红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。

被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的底部。

配血操作：

（1）取试管二支，标主次侧，主侧管加病人血清（血浆）2 滴，加供者3%-5%红细胞悬液1 滴，次管反之；

（2）各加LIM0.65mL，混合均匀后，再各加Polybrene 溶液2 滴，并混合均匀；

（3）用离心机3400 转/min 离心10 秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1mL 液体。

（4）轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做；

（5）最后加入Resuspending2 滴，轻轻摇动试管并同时观察结果。如果在60 秒内凝集散开，代表是由Polybrene 引起的非特异性聚集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可凝，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。人类ABO 血型抗体是以天然IgM 类血型抗体为主（包括MN、P 等血型抗体），这种血型抗体在室温盐水介质中与对应的红细胞抗原相遇，出现红细胞凝集反应，或激活补体，导致红细胞膜损伤，出现溶血。进行交叉配血试验时，观察受血者血清与供血者红细胞以及受血者红细胞与供血者血清之间有无凝集和溶血现象，判断供、受者之间有无ABO 血型不相合的情况。

2 讨论

2.1 Rh 血型抗原的检测结果是R1R2，D 抗原阳性；C 抗原阳性；c 抗原阴性；E 抗原阴性；e 抗原阳性。由于患者反复多次输血，E 抗体的产生猜测是因为输注了E 抗原阳性的血液，但不排除温自身抗体。如果开展Rh 血型抗原检测，其可以对D、E、C、e、c 五种抗原进行准确检测，对病人进行同型输注，可避免患者在异体输血的过程中因D、E、C、e、c 五种抗原的刺激产生相应的免疫性抗体，从而避免溶血性输血反应的发生。

2.2 在筛血的前提下，病人交叉配型的结果是凝聚胺法主侧、次侧均无凝集无溶血；微柱凝胶法主侧无凝集无溶血，次侧有凝集无溶血；由此结果可以推出凝聚胺法无法检出IgG 型的抗体，也说明凝聚胺法检测存在一定的缺陷。国内报道的抗-E 抗体几乎都有明显的抗原刺激过程，本文结果再次提示 ，为确保输血安全，交叉配血所用试验一定要真正能检出IgG 抗体。Rh 血型抗原检测能避免因相应抗原刺激产生抗体，再次保证输血的安全性。

2.3 如果是因为不规则抗体筛选试验阳性而导致的交叉配型(抗人球蛋白法)次侧凝集，则取经过筛查后的血样与患者做血交叉试验，理论上结果应该是无凝集无溶血的，但试验实际结果是主侧无凝集无溶血，次侧有凝集无溶血（微柱凝胶法），由此可以得出本次实验现象的发生不是由于不规则抗体筛选试验阳性引起，而是由于C 抗原e 抗原引起的。

3 结论

为了增加患者血液输注的安全性，故建议各医院输血科对患者血型以及科室库存的待发血样开展Rh 血型表型的检测；对于暂时没有开展Rh 血型表型检测的医院在遇到上述类似病例时，建议在完成凝聚胺法血交叉试验后加做微柱凝胶法血交叉试验，以弥补凝聚胺法无法检出IgG 型的抗体的缺陷，减少溶血性输血反应的发生。