李许丹 杨兰兰 刘环宇

【摘 要】小儿清肺化痰颗粒是临床常用药物，使用受众广、频率高，其药品质量直接关系到小儿患者生命健康。微生物限度检查法是判定药品微生物含量的重要方式，检查方法不同可能会得出不同结论。故此文章将以小儿小儿清肺化痰颗粒作为药品检验样本，将其分成对照组与试验组，分别对需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、大肠埃希菌进行科学试验，判定能否使用常规方法进行检查。

【关键词】小儿清肺化痰颗粒;微生物限度检查法;微生物限度檢查法

【中图分类号】R927.1 【文献标识码】B 【文章编号】1002-8714（2020）03-0-01

样品名称：小儿清肺化痰颗粒 检验依据：《中国药典》2015年版微生物限度检查法

批号：15120217;15120317;15120417 规格： 每袋装6克

检验日期：2015年12月4日 报告日期：2015年12月19日

生产单位：神威药业集团有限公司

培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、麦康凯液体培养基等。

实验仪器：立式灭菌柜、生化培养箱、隔水式恒温培养箱、生物安全柜。

1 阳性对照菌菌种

金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003] 铜绿假单胞菌 [CMCC（B）10 104]

枯草芽孢杆菌 [CMCC（B）63 501] 白色念珠菌 [CMCC （F） 98 001] 黑曲霉菌  [CMCC（F）98 003] 大肠埃希菌 [CMCC（B）44 102]（菌种来源：中国食品药品检定研究院）

对照菌制备：枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌采用10倍稀释法。制备成不大于100cfu/ml的菌悬液备用。

2 试验方法

通过对曾经进行过的方法适用性试验数据进行分析小儿清肺化痰颗粒没有抑菌性，可采用常规法进行试验。

供试液制备：称取10g，加入pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，振摇溶解，混匀制成1︰10的供试液。

2.1需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数检查

试验组：取上述供试液9.9ml，共5份，分别加入0.1ml枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌液后摇匀，使供试液的含菌量不大于100cfu/ml，分别从5支试验组试管中吸取2ml供试液加入2个平皿中，每皿1ml，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基;另从加入白色念珠菌、黑曲霉的菌液的试管中分别吸取2ml供试液加入2个平皿中，每皿1ml。倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，摇匀。

供试品对照组：吸取上述1 ：10供试液4ml分别加入4个平皿中，每皿1ml，2个平皿倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，2个平皿倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，摇匀。

菌液组：吸取pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液9.9ml，每份中加入与试验组相同的菌悬液后摇匀，操作同试验组。

培养计数：将胰酪大豆胨琼脂平皿放入30-35℃培养箱，沙氏葡萄糖琼脂平皿放入20-25℃培养箱进行培养，需氧菌不超过3天，霉菌和酵母菌培养不超过5天，在3天和5天分别进行计数。

批号15120217需氧菌总数计数：

阳性菌 代数 阳性菌数cfu/ml 供试品+阳性菌 供试品 回收率

1 2 均值 1 2 均值 1 2 均值

霉菌和酵母菌总数计数：

同法操作，批号15120317需氧菌总数计数：枯草芽孢杆菌的回收率：1.03、金黄色葡萄球菌的回收率：0.86、铜绿假单胞菌的回收率：0.71、白色念珠菌的回收率：0.95、黑曲霉菌的回收率：1.01。

霉菌和酵母菌总数计数：白色念珠菌的回收率：0.88、黑曲霉菌的回收率：0.80。

批号15120417需氧菌总数计数：枯草芽孢杆菌的回收率：0.93、金黄色葡萄球菌的回收率：0.86、铜绿假单胞菌的回收率：0.76、白色念珠菌的回收率：0.96、黑曲霉菌的回收率：0.80。

霉菌和酵母菌总数计数：白色念珠菌的回收率：0.68、黑曲霉菌的回收率：0.97。

从上述结果可以看出：采用常规法检验供试品，人工污染5株代表菌株，该供试品对铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的回收率试验均在0.5-2范围内，方法适用。

2.2大肠埃希菌检查

试验组：取1：10供试液10ml和不大于100cfu的大肠埃希菌置100ml胰酪大豆胨液体培养基中。

供试品对照组：照试验组，不加菌液作为供试品对照组。

菌液组：照试验组，不加供试液作为菌液对照组。

阴性对照组：取10mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液加入到100ml胰酪大豆胨液体培养基。

培养判断：上述制备好的胰酪大豆胨液体培养物置33℃培养箱中培养18小时后，分别取上述培养物1mL接种至100ml麦康凯液体培养基中，42-44℃培养24小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，33℃培养18小时。若麦康凯琼脂平板上有菌落生长，且试验组菌落形态与菌液对照组相同，则判断试验组大肠埃希菌检出;若试验组无菌生长或与菌液组菌落形态不同，则判定试验组大肠埃希菌未检出，应消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法适用性试验。结果如下：

从上述结果判断：试验组检出试验菌，通过控制菌检查方法适用性试验表明，常规法可用于进行供试品的大肠埃希菌检查。

3 结论

根据验证实验结果确定，小儿清肺化痰颗粒在微生物限度检查时需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、大肠埃希检查均可采用常规法进行检查。

参考文献

[1] 张文燕，郭福庆，曹晓云.半夏糖浆/半夏止咳糖浆微生物限度检查方法研究及质量分析[J].天津药学，2019，31（5）：21-25.

[2] 张小华，马新换，汪付田， 等.2种医院制剂微生物限度检查方法学适用性研究[J].中国药事，2019，33（8）：949-953.

[3] 吴琼，姚东，胡北， 等.决明降脂灵咀嚼片的质量标准及微生物限度检查[J].西北药学杂志，2019，34（4）：452-457.