亓水芹 冯向功

(郑州澍青医学高等专科学校病原生物与免疫学教研室，郑州 450064)

急性肺损伤是肺内外各种因素导致的急性炎症性肺损伤，可进展为急性呼吸窘迫综合征，病死率高达50%～70%[1]。肺泡上皮细胞损伤是急性肺损伤的主要病理特征之一，因此研究肺泡上皮细胞损伤分子机制对治疗急性肺损伤具有重要意义[2,3]。

MicroRNA(miRNA)是真核生物中高度保守的一类非编码小分子RNA，通过与靶mRNA的3′UTR区互补结合抑制基因转录后翻译以调节基因表达，参与急性肺损伤后炎症反应、细胞凋亡及肺泡液体清除等整个病理过程[4,5]。miR-221是一种具有类似癌基因功能的miRNA，近年来研究报道，miR-221与细胞炎症因子分泌也有关[6,7]。脂联素是脂肪细胞分泌的一种细胞因子，通过与脂联素受体(adiponectin receptor，AdipoR)结合参与抵抗炎症反应、调节葡萄糖和脂肪酸代谢等生命过程[8]。目前，miR-221和AdipoR1在急性肺损伤中的作用尚未见报道。

脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是革兰氏阴性菌细胞壁中的重要成分，可诱导宿主细胞炎性反应继而造成免疫功能障碍。国内外研究表明，气管内滴注LPS可造成大鼠急性肺损伤[9,10]。因此本研究采用LPS体外干预人肺泡上皮细胞A549，模拟肺损伤，研究miR-221和AdipoR1对肺泡上皮细胞炎症因子分泌和凋亡的影响，并初步探讨其潜在作用机制。

1 材料与方法

1.1材料 人肺泡上皮细胞A549由中国科学院上海细胞库提供；LPS(Sigma公司)；高糖DMEM培养基和胎牛血清(Gibco公司)；Trizol试剂和RIPA裂解液(Invitrogen公司)；Lipofectamine 2000转染试剂、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(碧云天生物技术研究所)；酶联免疫吸附法(ELISA)IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor，TNF-α)检测试剂盒购自北京索莱宝生物科技有限公司；……