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北柴胡转录因子BcbZIP179的基因克隆及原核表达*

2020-04-12韩文静朱楚然魏建和

世界科学技术-中医药现代化 2020年9期
关键词:分析

韩文静,徐 娇,朱楚然,隋 春,魏建和

(中国医学科学院&北京协和医学院药用植物研究所/中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室/濒危药材繁育国家工程实验室 北京 100193)

伞形科柴胡属多年生草本植物北柴胡(Bupleurum chinenseDC.),是我国药典规定的中药柴胡的基原植物之一。柴胡皂苷是北柴胡的主要药效成分之一,具有抗炎、保肝、提高免疫力等作用[1]。碱性亮氨酸拉链(basic leucine zipper,bZIP)转录因子,是真核生物转录因子中分布最广泛的家族之一[2],植物bZIP 转录因子能够参与调节多种生理功能,包括调节生长发育、调节次生代谢及生物与非生物胁迫的应答反应[3-4]。根据拟南芥碱性区域及其他保守区域的相似性78 个bZIP 转录因子可划分为13个组(A-I,S,M,K,J),同一组bZIP转录因子往往具有相似的结构特征及功能[5-6]。本研究在生物信息分析转录组转录因子基因[7]基础上,从北柴胡中克隆了1 个编码bZIP 转录因子的基因BcbZIP179,其氨基酸序列与胡萝卜(Daucus carotaL.)中的类bZIP53 蛋白同源性最高。利用qRT-PCR 对BcbZIP179的组织表达特性及受MeJA 诱导的表达特性进行分析,BcbZIP179可能与植物次生代谢相关。利用原核表达系统摸索出BcbZIP179适宜表达条件,获得体外表达的融合蛋白,为制备抗体、分离互作蛋白和调控靶基因奠定基础,为进一步研究其功能提供条件。

1 材料与方法

1.1 材料

所用北柴胡品种中柴2号种植于中国医学科学院药用植物研究所药用植物栽培育种试验地。BL21(DE3)、Transetta(DE3)菌株和原核表达载体 pET-28a、pEASY-Blunt E1 购自北京康为世纪生物科技有限公司。

1.2 试剂

高 保 真 DNA 聚 合 酶(PrimeSTAR HS DNA Polymerase)、PrimeScript™ RT Master Mix 反转录试剂于宝日医生物技术(北京)有限公司购买;……

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