李苗，余阳涛，冯光

(1.武汉药品医疗器械检验所，武汉 430075；2.湖北科技学院，咸宁 437100)

开塞露常用于治疗便秘、术后尿潴留等。常见的开塞露有两种制剂，一种是甘油制剂，另一种是甘露醇、硫酸镁制剂。两种制剂成分不同，但作用原理基本一样，都是利用甘油或山梨醇高浓度的高渗作用，软化大便，刺激肠壁，反射性引起排便反应，再加上其具有润滑作用，能使大便容易排出。开塞露中甘油含量测定的方法主要有滴定法、近红外光谱法[1-3]、紫外-可见分光光度法[4]，但上述方法操作较繁琐，且专属性较差。笔者在本实验中建立了采用示差折光检测器的高效液相色谱(HPLC)法测定开塞露中甘油的含量，方法准确、专属、快速，适用于含甘油开塞露大通量样品的质量控制，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1仪器 Agilent1260型高效液相色谱仪(配示差折光检测器，美国安捷伦公司)；Mettler SX105电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多仪器公司，感量：0.01 mg)；Millipore simplicity超纯水机(美国密理博公司)。

1.2试药 甘油对照品(中国食品药品检定研究院，批号：190057-201301，含量：99.5%)，开塞露(市售样品，规格：含甘油52.8%～58.3%，批号：160419，170403，160517)，氯化钙二水合物(国药集团，分析纯，批号：20170214)，水为纯水机制超纯水(18.2 mΩ)。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：钙型阳离子交换柱[Rezex RCM-Monosaccharide Ca2+(8%)，300 mm×7.8 mm]；流动相：0.1%氯化钙二水合物溶液；流速：0.6 mL·min-1，柱温：60 ℃；进样量：20 μL；检测器：示差折光检测器，温度55 ℃。甘油色谱峰保留时间约17 min，理论板数按甘油峰计算不低于10 000。

2.2对照品溶液的制备 称取甘油对照品适量，精密称定，加纯化水溶解并稀释制成0.5 mg·mL-1溶液，作为对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备 取开塞露3支，将内容物混匀，精密称取1 g，置100 mL量瓶，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品储备溶液，精密量取5 mL，置50 mL量瓶，用水稀释至刻度，制成0.5 mg·mL-1溶液，作为供试品溶液。

2.4阴性空白溶液的制备 取不含甘油的空白辅料，同法制备阴性空白溶液。阴性空白溶液在甘油峰保留时间处未检出其他色谱峰，说明空白辅料对实验结果无干扰。色谱图见图1。

A.系统适用性溶液；B.阳性空白；C.对照品；D.样品；1.甘油；2.丙二醇；3.二甘醇。

图1 甘油含量测定HPLC图

A.system suitability solution;B.positive blank solution;C.reference substance;D.sample;1.glycerol;2.propylene glycol;3.diglycol.

Fig.1HPLCchromatogramsofglycerol

2.5专属性实验 分别称取甘油、丙二醇、二甘醇对照品适量，用纯化水溶解并稀释制成0.5 mg·mL-1溶液，作为系统适用性溶液。照“2.1”项下方法测定，甘油、丙二醇、二甘醇色谱峰可完全分离。色谱图见图1。

2.6强制降解实验 取供试品储备液5 mL各5份，分别置50 mL量瓶，①加0.1 mol·L-1盐酸10 mL，放置30 min，0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液中和，水稀释至刻度；②加0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液10 mL，放置30 min，0.1 mol·L-1盐酸中和，水稀释至刻度；③加入10%过氧化氢溶液0.5 mL，放置30 min，水稀释至刻度；④水浴加热30 min，水稀释至刻度；⑤254 nm波长下光照24 h，水稀释至刻度。对5份溶液进行测定，降解产物与甘油分离度均符合要求。见图2。

2.7线性关系考察 称取对照品适量，精密称定，用纯化水溶解并稀释制成甘油含量0.03，0.08，0.3，1.6，2.8 mg·mL-1系列对照品溶液，分别精密进样20 μL，以甘油浓度(X)对相应峰面积(Y)进行回归，结果甘油回归方程为：Y= 2.37×106X+7.80×104，r=0.999 0。甘油在0.03～2.8 mg·mL-1范围内，浓度与峰面积之间具有较好的线性关系。

2.8精密度实验 取对照品溶液，连续进样6次，以甘油峰面积计算得RSD为0.3%，结果表明仪器精密度良好。

2.9定量限 取“2.2”项下对照品溶液，逐步稀释，进样测定。当信噪比(S/N)为10时，甘油定量限为4.4 μg·mL-1。

2.10重复性实验 取同一批样品，按“2.3”项制备供试品溶液6份，依法测定，采用外标法以峰面积计算供试品中甘油含量，结果平均含量55.32%，RSD为1.6%。说明该方法重复性良好。

A.酸破坏；B.碱破坏；C.氧化破坏；D.热破坏；E.光破坏；1.甘油；2.丙醇。

A.acid destruction; B.alkali destruction; C.oxidation destruction; D.thermal destruction; E.light destruction；1.glycerol；2.propylene glycol.

Fig.2HPLCchromatogramsofcompulsorydestructiontests

2.11稳定性实验 精密量取供试品溶液20 μL，在2，4，8 h分别进样测定，甘油峰面积RSD为0.7%，结果表明供试品溶液8 h内稳定。

2.12加样回收率实验 取本品0.4 g，精密称定，置100 mL量瓶，分别精密加入甘油对照品适量，纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置50 mL量瓶，水稀释制成高、中、低浓度甘油溶液各3份，分别进样20 μL，外标法以峰面积计算回收率。结果甘油平均回收率99.37%，RSD为1.4%，见表1，表明该方法回收率良好。

表1 甘油加样回收率实验结果

Table.1Recoverytestofglyceroln=9

样品取样量甘油加入量甘油测得量g回收率/%0.389 30.258 90.474 998.520.439 30.269 30.512 698.200.388 20.274 40.493 499.910.423 20.326 10.566 6100.440.387 50.335 80.560 2101.640.436 50.354 60.593 297.770.380 00.403 00.618 7100.260.449 20.416 70.663 998.440.409 60.387 00.615 399.22

2.13样品测定 精密量取供试品溶液及对照品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算甘油含量，结果见表2。经t检验，两种方法测定结果差异无统计学意义。

表2 3批样品中甘油含量测定结果

Table.2Resultsofthedeterminationonthreebatchesofsamples%

批号HPLC法含量滴定法含量16041956.556.917040355.755.216051756.755.8

3 讨论

3.1色谱柱选择 笔者在本实验中以专属性强的钙型阳离子交换柱为色谱柱，可将甘油与结构类似物丙二醇、二甘醇等完全分离，故最终选择钙型阳离子交换柱为本实验的色谱柱。

3.2检测器选择 笔者在本实验采用示差折光检测器进行甘油的检测。由于甘油基本无紫外吸收，不适合常规紫外检测器测定；示差折光检测器为通用型检测器，可以对甘油进行有效检测，故选择示差检测器为本实验色谱系统的检测器。

3.3流动相选择 笔者在本实验中分别考察不同浓度氯化钙溶液对分离效果的影响。结果表明，氯化钙溶液浓度越高，甘油保留时间越长，与其他色谱峰分离度越大。综合考虑分离度与保留时间，笔者在本实验中采用0.1%氯化钙溶液作为流动相。

3.4结果 现行国家标准采用容量法测定开塞露中甘油含量，而现有文献报道方法主要有电位滴定法、分光光度法、近红外光谱法等[5-7]。笔者在本实验中采用HPLC法测定开塞露中甘油含量，专属性强，操作简便，重复性好。可用于开塞露中甘油含量的大通量检测，还可以在药品安全监管工作中进行药品中可能存在非法添加二甘醇情况的风险筛查，避免二甘醇非法替代甘油使用导致的药害事件发生。