李 昕 曹 珂 魏子妤 侯霄枭 胡婷婷 潘展砚 吴 琼 Christos C. Zouboulis 鞠 强

1上海交通大学医学院附属仁济医院皮肤科，上海，200127；2上海交通大学医学院附属仁济医院南院皮肤科，上海，201112；3 Departments of Dermatology, Venereology, Allergology and Immunology, Dessau Medical Center, Brandenburg Medical School Theodor Fontane, Germany

人皮肤上定殖了多样的微生物菌群，可能与痤疮、玫瑰痤疮、特应性皮炎、银屑病等皮肤疾病有关[1-3]。作为寄居在人表皮的正常生物菌群，微生物也参与了皮肤正常生理功能的发挥与调节如参与皮肤屏障功能[4，5]，但微生物对于表皮的作用是否具有普遍性以及与微生物的量之间的关系还缺乏相关研究。病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)是病原微生物表面结构恒定且进化保守的分子结构，包括革兰氏阳性菌的细胞壁成分脂磷壁酸(lipoteichoic acid，LTA)和肽聚糖(peptidoglycan，PGN)以及革兰氏阴性菌的细胞壁的成分脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)，为微生物生存必需和宿主天然免疫细胞特异性识别的分子基础和微生物致病的主要结构。为了探究皮肤微生物对表皮的增殖与分化的影响以及微生物的量与其之间的关系，我们使用了皮肤和皮脂腺细胞共培养的3D离体皮肤模型。研究不同浓度的PAMPs对皮肤表皮细胞增殖及分化的影响，评估皮肤微生物作为皮肤屏障的一部分，对人表皮的保护与调节作用。

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器 LPS(Sigma，来源于大肠杆菌055：B5)，溶于磷酸盐缓冲液中，分装后-20℃备用；LTA(Sigma，来源于金黄色葡萄球菌)，溶于双蒸水中，分装后-20℃备用；PGN(Sigma，来源于金黄色葡萄球菌)，溶于PBS中配成混悬液，分装后-20℃备用；兔抗人Ki67一抗(Servicebio，GB13030-2)，鼠抗人CK10(Cytokeratin 10)一抗(Santa Cruz Biotechnology，sc-23877)。免疫组化试剂盒(博士德)，DAB显色剂(博士德)，石蜡包埋机(Leica)，自动脱水机(Leica)，石蜡切片机(Leica)，正置荧光显微镜(OLYMPUS)。……