邹 强 张其华 李 璃

1.南京医科大学附属脑科医院(210008)； 2.南京医科大学附属附属儿童医院；3.南京医科大学附属南京市妇幼保健院

子痫前期(PE)是妊娠期常见并发症[1]。随病情发展可演变成重度子痫前期(SPE),全球孕妇子痫前期发病率为2%～8%,而死亡孕产妇中17%～24%是由SPE所致[2]。根据发病时间分为早发型(ESPE)和晚发型重度子痫前期(LSPE)[3]。研究认为[4],ESPE和LSPE发病机制不同,且ESPE具有发病隐匿性、病情进展迅速性等特点,对母婴危害远大于LSPE。因此寻找预测ESPE、LSPE发病的生化指标有重要临床意义。有研究认为ESPE可能与胎盘组织中某些蛋白异常表达相关。Staufen1蛋白(STAU1)在机体各组织中均有表达,参与细胞发育、分化、凋亡等过程[5]。考虑到此过程与胎盘滋养层细胞具有相似生物学行为,我们推断STAU1可能在胎盘组织中起到一定作用。胎盘生长因子(PLGF)在胎儿血管生成中发挥重要作用[6]。鉴于STAU1与PLGF在胎盘组织中可能存在的生物学行为特性,本研究分析了孕妇胎盘组织中二者表达水平与ESPE、LSPE发病关系,探讨其与妊娠结局关系,以期为临床预防和监测SPE病情进展提供依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2017年1月—2019年10月于本院分娩的SPE孕妇86例,其中ESP43例(ESPE组),LSPE43例(LSPE)。纳入标准：①SPE孕妇均符合乐杰主编《妇产科学》中诊断标准；②单胎妊娠,剖宫产分娩；③孕妇及家属知情并签署同意书。排除标准：①合并糖尿病、甲亢、肝肾功能不全、免疫系统疾病等；②多胎妊娠、宫内感染、胎膜早破等；③有既往不良妊娠史等。同期正常妊娠分娩孕妇43例为对照组。匹配标准：①年龄、体质指数等基线资料匹配；②孕期产前检查正常,未见PE或其他并发症；③单胎且自愿行剖宫产分娩。本研究经本院伦理委员会审批。

1.2 方法

1.2.1样本采集剖宫产后5min内在胎盘中央母体面取胎盘组织,生理盐水反复冲洗干净后,分割组织块置4%多聚甲醛保存待测。

1.2.2 STAU1检测方法取50mg胎盘组织样本进行蛋白质提取并检测蛋白浓度。待蛋白质变性后置-20℃恒温箱内。采用凝胶电泳转膜处理样本1h,5%脱脂奶粉封闭样本2h。处理结束后在样本中加入兔抗人STAU1抗体(美国Signalway公司)和兔抗人GAPDH抗体(上海酶联生物科技有限公司),置4℃ 24h。恢复室温30min后加入HRP标记的山羊抗兔抗体(北京百奥莱博科技有限公司)孵育2h。采用Azure Biosystems C600成像系统分析STAU1蛋白表达水平。

1.2.3 PLGF检测方法将4%多聚甲醛固定24h以上胎盘组织样本常规石蜡包埋切片,免疫组化学法检测胎盘组织中PLGF水平,试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司。将样本石蜡切片放入60℃烤片机处理20min,磷酸缓冲盐溶液(PBS)充分洗涤切片后采用二甲苯脱除切片中石蜡。分别采用不同浓度乙醇水化处理切片,将切片置于pH=6.0的枸盐酸纳缓冲液,放入100℃水中孵育20min。取出处理好的切片封闭处理20min,再次PBS洗涤。样本中加入兔抗人PLGF多克隆抗体(美国Proteintech公司)置4℃恒温箱24h。恢复室温后用PBS清洗样本,加入HRP标记的山羊抗兔抗体(北京百奥莱博科技有限公司)孵育30min,使用DAB试剂盒显色,利用Powersite410显微图像分析系统计算光密度值,从而代表胎盘组织中PLGF表达水平。

1.3 观察指标

比较ESPE、LSPE及对照组产妇胎盘组织中STAU1、PLGF表达水平,记录胎盘重量、新生儿出生体重、1min Apgar评分等妊娠结局情况。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 一般资料

ESPE组年龄(30.3±4.7)岁(25～37岁),体质指数(BMI)(29.7±1.4)kg/m2；LSPE组年龄(30.7±4.4)岁(26～36岁),BMI(30.1±1.5)kg/m2；对照组年龄(30.6±4.8)岁(26～38岁),BMI(29.9±1.6)kg/m2。3组年龄、BMI无差异(P>0.05)。

2.2 胎盘组织中STAU1 、PLGF 表达

胎盘组织中STAU1、PLGF表达水平,ESPE组均低于LSPE组和对照组(P<0.05),LSPE组和对照组比较无差异(P>0.05)。见表1。

2.3 妊娠结局情况

胎盘重量、新生儿出生体重、新生儿1min Apgar评分均ESPE组低于LSPE组和对照组,且LSPE组均低于对照组(P<0.05)。见表2。

表1 3 组胎盘组织中STAU1 、PLGF 表达水平比较

表2 3 组孕产妇妊娠结局比较

2.4 Pearson 相关性分析

以发生ESPE为自变量,新生儿出生体重、新生儿1min Apgar评分、胎盘重量为因变量进行Pearson相关性分析。ESPE与新生儿出生体重(r=-0.441)、新生儿1min Apgar评分(r=-0.572)、胎盘重量(r=-0.615)均呈负相关(P=0.000)。

3 讨论

20世纪80年代,国外学者以孕34周为界提出了早发型重度子痫前期和晚发型重度子痫前期概念。随着研究深入,众多学者认为ESPE与LSPE的致病机理、临床特征及生物标记物均不同[7]。相关数据表明,SPE患者中5%～20%为ESPE,75%～80%为LSPE,虽然ESPE占比较小但对母婴健康威胁更大[8]。ESPE与LSPE发展过程均存在胎盘灌注不良和胎盘功能障碍,继而引发机体产生应激反应而促使炎症因子大量释放,从而使母体表现出临床症状[9]。由于ESPE、LSPE的发病机理具有多因素、多机制特点,加强ESPE、LSPE病情发展预测及诊疗对改善妊娠结局有重要意义。

STAU1是一类双链RNA结合蛋白,Bonnet Magnaval[10]等报道STAU1不仅在人体各组织表达,而且还是一种应激反应基因,使细胞具有抗氧化应激能力。此外,STAU1还可在细胞分化、增殖、凋亡等过程中发挥重要作用,因此普遍认为STAU1在正常细胞中发挥不可替代作用[11]。本研究发现,ESPE孕产妇胎盘组织中STAU1表达显著低于LSPE组和对照组,提示ESPE发病过程会抑制STAU1蛋白表达。虽然LSPE胎盘组织中STAU1水平与对照组未见差异,说明ESPE孕产妇胎盘组织STAU1低表达与ESPE病情发展有一定关联。分析认为,ESPE发病过程会因胎盘灌注不良及胎盘功能障碍诱发机体炎症因子爆发,而STAU1作为一种抗氧化应激因子,在炎症反应强烈时表达水平被抑制。

胎盘组织中滋养细胞和血管内皮细胞均可分泌PLGF,通过与滋养细胞、血管内皮细胞上络氨酸酶受体结合,刺激受体细胞DNA生长、增殖、分化；作用于血管内皮细胞时还可促进细胞分裂和分化,调节胎盘、胎儿血管生成和血管网重铸。由于PLGF与胎盘组织的密切关联,临床上常将PLGF作为评估SPE危险程度的生化因子之一。一些研究显示PLGF表达水平降低与SPE病情进展相关：Caroline Diguisto[12]等报道ESPE孕产妇血清及胎盘PLGF均低于正常孕产妇；王茜[13]等提出SPE患者血清PLGF表达水平可作为SPE病情进展早期预测指标之一。本研究发现,ESPE孕产妇胎盘组织中PLGF表达显著低于LSPE组和对照组,而LSPE组与对照组未见差异,与王慧娟[14]等报道结果一致。分析认为,PLGF表达降低会降低胎盘滋养细胞、血管内皮细胞的增殖、趋化过程,进而抑制胎盘、胎儿血管诱导生成过程,胎盘血管重塑障碍而诱发ESPE。

本研究不同孕产妇妊娠结局结果表明,孕产妇胎盘重量、新生儿出生体重、新生儿1min Apgar评分ESPE组最低,LSPE组其次,对照组最高,与文献[15]报道一致。提示相比LSPE,ESPE对妊娠结局的影响更明显。需要特别说明的是,由于对照组孕妇均属正常妊娠分娩,因而相比ESPE、LSPE两组孕周更长,由于胎儿发育及胎盘重量均与孕周密切相关, 使得ESPE、LSPE两组的胎盘重量、新生儿出生体重必然会低于对照组。故本研究将重点关注ESPE、LSPE两组孕产妇的妊娠结局。分析认为,由于ESPE发病过程中并发炎症反应和胎盘血管重塑抑制,胎盘血管网络障碍限制了胎盘绒毛间隙和绒毛血管为母胎物质交换,不仅干扰了胎盘功能运转,还会导致胎儿发育迟缓,从而导致ESPE孕产妇分娩时孕周早、新生儿体重轻、Apgar评分低等妊娠结局。ESPE胎盘组织PLGF活性降低还会影响胎盘血管构建和生长,因此产妇胎盘重量低于LSPE组和对照组。相关性分析表明,ESPE与新生儿出生体重、新生儿1min Apgar评分、胎盘重量呈负相关,进一步提示ESPE不利于妊娠结局。

综上所述,ESPE孕妇胎盘组织中STAU1、PLGF显著低表达,而LSPE孕妇与正常孕妇差异不显著,说明胎盘组织中STAU1、PLGF可能参与了ESPE发病过程,其表达水平被抑制。ESPE孕产妇分娩时发生孕周早、新生儿出生体重及Apgar评分低的概率较大,增加了不良妊娠结局风险,提示临床上应予以重视。