沙塔娜提 史 深 廖力夫 孙亚伟 赵红琼 徐艺玫

(1.新疆农业大学， 乌鲁木齐 830002)(2.新疆疾病预防控制中心， 乌鲁木齐 830002)

子午沙鼠(Meriones.meridianus)属于啮齿目(Rodentia)，仓鼠科(Cricetidae)，沙鼠亚科(Gerbillinae)，小沙鼠属(Meriones)[1]，为中等体型鼠，体长105～155 mm；因产地不同而存在较大的差异。体背深灰棕色，后足踵部有一点状小块裸露区。本实验室繁殖的子午沙鼠是分布于吐鲁番盆地的叶氏亚种(M.meridianusjei)[2-3]，体型明显小于其它亚种。子午沙鼠具有耐干旱，性情温和，易饲养繁殖等特点。自1996年实验室繁殖以来，子午沙鼠在包虫病动物模型[4]、戊型肝炎动物模型[5]等方面显示出明显的应用前景。根据我国实验动物标准化的要求，新培育的子午沙鼠必须按实验动物标准的要求，逐步完善其生物学特征的数据库的建立。虽然子午沙鼠的实验室繁殖已有近20多年的经验，但有关子午沙鼠雌体发情周期缺乏详细的资料。为掌握子午沙鼠雌体发情规律，本文拟用HE染色法对性成熟6月龄子午沙鼠进行发情周期的实验观察，为雌性子午沙鼠的科学合笼配对、种群繁殖和实验动物标准化的完成，提供科学依据和数据库。

1 材料与方法

1.1 实验动物

新疆吐鲁番雌性清洁级6月龄子午沙鼠24只，由新疆自治区疾病预防控制中心实验动物研究中心提供，本实验在新疆疾病预防控制中心实验动物研究中心进行(SYXK(新)2016-0001)，饲料为全价小鼠繁殖饲料(成都达硕实验动物有限公司)，垫料为新疆自治区疾病预防控制中心实验动物研究中心提供的纸屑垫料，子午沙鼠饲养室控制温度18～24 ℃，相对湿度40%～70%，明暗交替14 h/10 h[6]。

1.2 试剂与仪器

苏木精(北京索莱宝科技有限公司)，伊红染液(上海吉至生化科技有限公司)，磷酸缓冲液(北京万佳首化生物科技有限公司)，显微镜(Nikon MODEL ECLIPSE Ci-L TOKYO,JAPAN)。

1.3 实验方法

1.3.1采样：每天间隔4 h采样一次，保定动物，移液器吸取20 μL生理盐水数次冲洗阴道吸出阴道脱落细胞，涂于载玻片，自然干，进行HE染色后镜检及细胞分类计数。

1.3.2染色方法：HE染色法是将自然干燥的阴道涂片浸润苏木素染液染色5～10 min，流水冲洗，盐酸乙醇分色数秒(根据涂片染蓝色的深浅确定时间)。自来水浸泡返蓝5 min，伊红染液染色3 min，流水冲洗。干燥，镜检[7]。

1.3.3镜检及角化细胞分类计数：根据长爪沙鼠发情规律[8]，将观察的图片根据角化细胞分类计数法分不同的4个发情周期，分别为发情前期、发情期、发情后期、发情间期。

1.4 统计方法

2 结果

2.1 雌性子午沙鼠发情周期持续时间

从表1可知，子午沙鼠的发情周期为(4.7±1.2)d，其中发情前期(22.0±12.0) h，发情期(26.8±8.1) h, 发情后期(18.2±9.1) h，发情间期(50.0±38.2) h，占总发情周期的19.5%、23.8%、16.1%和44.3%。

表1 雌性子午沙鼠发情周期持续的时间Table 1 The duration of estrus cycle

2.2 子午沙鼠不同发情周期阴道脱落细胞比例变化和特征

图1显示，发情前期、发情期、发情后期和发情间期的各类上皮细胞形态和比例存在显著性差异。细胞涂片也存在明显的不同特征。结果见图2。

图1 子午沙鼠发情周期各时期阴道脱落细胞比例注：各发情周期有核上皮细胞，角化细胞，淋巴细胞都差异显著(P<0.05)Fig.1 The proportion of vaginal exfoliated cells in Meriones.meridianus different stages of estrus Note：There were nucleated cells, cornified cells and lymphocytes in each estrous cycle (P<0.05)

图2 雌性子午沙鼠各个发情周期涂片注: A.发情前期涂片 B.发情期涂片 C.发情后期涂片 D.发情间期涂片(HE，×100)Fig.2 Slides of M.meridianus each estrous phasesNote: A；Proestrus slide；B：Eestrus slide；C：Metoestrus slide；D：Dioestrus slide(HE，×100)

3 讨论

目前在国内关于子午沙鼠生物学特性已有报道，但仅限于繁殖周期，生仔数目等内容[8-10]，有关子午沙鼠雌体发情规律的相关内容所知甚少，无法满足今后的研究需要，因此有必要开展子午沙鼠发情规律的研究。

目前用于鉴定动物的发情期方法主要有巴氏染色法，唾液结晶法[11]，温度检测法[11]，瑞氏染色，HE染色，以及阴道外观和阴道栓观察法[12]。唾液结晶法，温度检测法，阴道外观和阴道栓观察法仅能粗略判断发情周期，巴氏染色法染色步骤较繁杂，瑞氏染色虽然步骤简单，易操作，但辨认细胞需要一定的经验。HE染色法[7]操作简易便捷，可快速观察鉴定动物的阴道上皮细胞，是目前动物发情周期常用的方法。

本实验用HE染色法观察并记录角化细胞的分类和数量，证实雌性子午沙鼠的发情周期为(4.7±1.2)d，发情周期分4个时期：发情前期(22.0±12.0) h，发情期(26.8±8.1) h，发情后期(18.2±9.1) h和发情间期(50.0±38.2) h。从实验结果和已有文献[7]看，HE染色法和间隔4 h采样法可以判定雌性子午沙鼠发情的各个性周期。

陈立青等[8]每天采样一次长爪沙鼠阴道材料，用瑞氏染色和HE染色法观察阴道各类上皮细胞形态和比例，提供简易、便捷、快速观察鉴定长爪沙鼠阴道上皮细胞的方法，显示长爪沙鼠的发情周期为(4.4 ±1.5) d，郑鹏等[12]用阴道外观和阴道栓每隔12 h采样观察昆明小鼠的发情，发情周期范围大概在(4～5)d[13]，该方法操作人员需要一定的经验才能熟练。本研究用间隔4 h采样，结合HE染色法观察了子午沙鼠的发情周期为(4.7±1.2) d，与长爪沙鼠和昆明小鼠的发情周期略有不同，但获得的发情周期更准确，表明适当短的采样间隔时间比间隔12 h或1 d的采样获得的发情周期更易准确。从本实验早期预实验结果看，间隔(4～8)h采样对细胞数量和发情周期观察影响有限，而太短的采样间隔时间可能会对细胞数量和发情周期分析造成一些影响。

据陈立青等[8]报道，长爪沙鼠的发情前期、发情期、发情后期和发情间期分别占发情期的19.9%、24.4%、16.7%和45.5%，子午沙鼠各相应发情期为19.5%、23.8%、16.1%和44.3%，两者数据非常接近，可能与同属小沙鼠属动物，遗传上亲缘较近有关。