许晓敬　唐培培　禹宝成　郭传滨　杨立均　孙会忠

摘要    采用平板分离技术从烟草根际土壤中分离到一个菌株，编号为XXJ15，并对该菌株的几种活性功能进行了评估。结果表明，XXJ15在魔芋粉液体鉴别培养基经过48 h发酵后，发酵液中的β-甘露聚糖酶活性达到4.6 U/mL;在解磷液体鉴别培养基中培养72 h后，培养基上清液中游离态磷含量达到102 μg/mL;XXJ15不具备解钾活性。因此，菌株XXJ15可作为后期诱变育种、烟草专用菌肥和土壤保育剂开发等研究的备用菌株。

关键词    植烟土壤;酶活性;解磷菌;分离;活性评估

中图分类号    S182        文獻标识码    A

文章编号   1007-5739（2020）02-0174-01                                                                                     开放科学（资源服务）标识码（OSID）

Abstract    A strain named XXJ15 was isolated from tobacco rhizosphere soil by plate separation，and the activity function of the strain were evaluated.The results showed that after 48 h fermentation in the liquid identification medium of konjac powder，the activity of β-mannanase in the fermentation broth reached 4.6 U/mL.After culture for 72 h in the phosphorus solution identification medium，the free phosphorus content in the supernatant of the medium reached 102 μg/mL.XXJ15 didn′t have potassium activity.Therefore strain XXJ15 can be used as a backup strain for later mutagenesis breeding，tobacco special bacterial fertilizer and soil conservation agent development.

Key words    tobacco-growing soil;enzyme activity;phosphate-solubilizing bacteria;isolation;activity evaluation

烟草是我国一种传统的经济作物，但在实际栽培过程中，耕作层土壤的劣变给烟叶生产造成了很大的困扰，成为制约产量和品质提高的不利因素[1-2]。尽管微生物肥料或制剂起效普遍较慢，但通过一系列绿色或有机栽培技术的使用，保证烟叶品质和特色成为第一要务[3]。我国约有74%的耕地缺磷，难溶性磷酸盐是土壤中绝大部分磷主要的存在形式，植物不能直接吸收利用[4-6];土壤中的有效钾易流失，需及时补充，尤其是对于嗜钾作物烟草来说补充钾肥更为重要[7-8];活性多糖对植物生长和土壤中的微生物活性起着重要作用。本研究对从烟草根际土壤中分离到的一株菌的生物学活性进行了初步评估，现将结果报道如下。

1    材料与方法

1.1    试验材料

土壤样品采自驻马店市植烟区烟田。

牛肉膏蛋白胨培养基[9]：牛肉膏3 g/L，蛋白胨5 g/L，氯化钠10 g/L，琼脂20 g/L，pH值7。

魔芋粉鉴别培养基[10]：魔芋精粉5 g，硫酸镁5 g，硝酸钠3 g，磷酸钾1 g，硫酸铁0.01 g，琼脂粉20 g，蒸馏水1 000 mL，自然pH值。

解磷菌鉴别培养基[6]：硫酸铵0.5 g，葡萄糖5.0 g，氯化钠0.5 g，氯化钾0.3 g，硫酸铁0.03 g，硫酸镁0.3 g，硫酸锰0.03 g，鸡蛋黄10 mL，菊糖1.0 g，琼脂粉18.0 g，蒸馏水1 000 mL，自然pH值。

解钾菌发酵培养基[8]：按100 g培养基计，分别含有钾长石0.3 g（超纯水水洗5次），磷酸氢二钠0.2 g，碳酸钙0.01 g，七水硫酸镁0.5 mg，三氯化铁0.5 mg，蔗糖0.5 g，海藻糖0.1 g，琼脂粉1.8 g，pH值控制在7.0～7.5。

LB培养基[9]：斜面和活化培养基。

1.2    试验方法

1.2.1    菌株的获得。称取土样5 g，无菌操作加入装有45 mL生理盐水的250 mL三角瓶中，振荡20 min，静置30 s，制成10-1土壤稀释液。再按10倍梯度稀释至10-6浓度。取10-6、10-5、10-4 3个梯度稀释液各0.1 mL涂布牛肉膏蛋白胨培养基平板，于37 ℃恒温培养3 d。用接种环挑取单菌落并划线纯化，获得目标菌株，斜面培养基4 ℃保藏。