焦润菊

摘要    为了评估和监管青海省油菜转基因情况，2016年对省内互助、门源、乐都等11个市县的42批样品进行了检测。通过定性PCR，检测发现CruA内标准基因、CaMV 35S启动子、FMV 35S启动子、NOS终止子、HPT基因、NPT II基因、Bar基因和PAT基因均为阴性，未发现转基因油菜籽。鉴于转基因作物违法滥重的问题严重性，对青海省转基因作物监管工作提出了相应建议。

关键词    油菜籽;转基因;青海省;2016年

中图分类号    S565.4        文献标识码    A

文章编号   1007-5739（2020）02-0011-02                                                                                     开放科学（资源服务）标识码（OSID）

油菜属于十字花科芸薹属，是重要的油料作物和优质的蛋白饲料作物，也是转基因技术应用较多的农作物[1]。从1996—2015年的20年间，全球转基因作物累计种植面积达20亿hm2，其中转基因油菜累计种植面积达到1亿hm2，仅次于大豆、玉米和棉花[2]。青海省地处青藏高原高海拔地区，太阳辐射强、气候冷凉、日照时间长、空气湿度小、昼夜温差大，适宜喜温凉作物油菜的生长。近年来，随着全省农业结构调整，随着优质油菜的推广，油菜种植面积有了较快的增长，常年种植面积20万hm2，总产达28.2万t[3]。

截至2017年3月，全球商业化的转基因油菜转化事件有24个[4-6]，中国尚未批准转基因油菜的商业化种植。为了加强青海省农业转基因生物安全监管，防止农业转基因作物的非法扩散，青海省农牧厅于2016年4—10月对全省油菜籽进行转基因抽样调查。

1    材料与方法

1.1    供试材料

來自青海省11个市县的42份油菜籽样品，涉及12个品种（表1）。

1.2    试验方法

所有样品由农业部转基因植物环境安全监督检验测试中心（武汉）进行检测，检测项目如下。①芸薹素（CruA）内标准基因。内标准基因（endogenous reference gene）是指具有植物物种专一性且拷贝数恒定、不显示等位基因变化的保守 DNA序列，目前开发内标准基因主要用于转基因作物的定性和定量检测[7]。芸薹素（CruA）基因是国家比较认同的油菜内标准基因之一。检验灵敏度0.10%，检测依据为农业部2031号公告-9-2013。②花椰菜花叶病毒（CaMV）的35S启动子、玄参花叶病毒（FMV）的35S启动子和胭脂碱合成酶基因（NOS）的终止子。三者均为国内外商业化转基因作物中普遍使用的调控元件，可以作为转基因检验的依据。检验灵敏度0.10%，检测依据为农业部1782号公告-3-2012。③潮霉素磷酸转移酶（HPT）基因。HPT基因编码潮霉素磷酸转移酶（hygromycin B phosphotransferase，HPT），是遗传转化中最常用的一类选择标记性基因。HPT可使潮霉素B（hygromycin B）磷酸化而失活，潮霉素是一种氨基糖苷类抗生素，可破坏细胞中核糖体的功能，导致基因翻译受阻细胞死亡[8]。在选择压力下，不含标记基因及其产物的非转化细胞和组织死亡，转化细胞由于有抗性可继续成活、分裂并分化成植株[9]。检验灵敏度0.10%，检测依据为农业部1782号公告-3-2012。④新霉素磷酸转移酶（NPT II）基因。在植物的遗传转化研究中，最常用的遗传标记基因为NPT II 基因，该基因编码的新霉素磷酸转移酶能使植物产生抗卡那霉素特性，因而用卡那霉素可以对转化植株进行筛选[10-11]。对于NPT II的检测也是油菜籽转基因检测的常用方法。检验灵敏度0.10%，检测依据为农业部1782号公告-3-2012。⑤除草剂抗性基因（Bar或PAT）。Bar和PAT基因都是常用的选择标记基因之一。将其与其他目的基因（抗虫、抗病基因等）构建到同一载体上，筛选转化细胞时，只要在选择培养基中加入一定量的除草剂，就能杀死非转化细胞，生存下来的就是含有目的基因的转化细胞。检验灵敏度0.10%，检测依据为SN/T 1204-2003。

定性PCR的引物及扩增程序等反应条件参照农业部相关行业标准[12-14]。

2    结果与分析

此次抽样调查，经过检测发现全部42个油菜籽样品中，8个基因的检测全部为阴性，未发现转基因油菜籽。

3    结论与讨论

农业转基因生物的安全监管是保障转基因产业健康、有序发展的重要举措。中国政府高度重视转基因生物的安全监管，于2001年颁布《农业转基因生物安全管理条例》，并于随后发布一系列配套管理办法，对农业转基因生物的研究、生产、加工、经营和进出口活动进行全过程的严格监管[15]。由于转基因作物通常具有抗虫、抗病、抗寒、抗旱等优良性状，部分农民在不知情的情况下可能会误种，2015年通过省部联动，在新疆、甘肃、海南销毁了逾73.33 hm2违法转基因玉米。

青海省此次抽查未发现转基因油菜非法种植情况，但是依然需要提高警惕，防止转基因作物违法滥种。在青海省转基因监管工作中，一是要进一步加强转基因监管工作，让投机者无机可乘;二是规范转基因科研活动的监管程序，防止转基因作物非法流出;三是加强转基因工作的科普宣传，在严管的同时让百姓理性看待转基因技术，避免监管工作被错误解读。

4    参考文献

[1] 刘晓，景寅.转基因油菜研究进展[J].现代农业科技，2010（9）：80-81.

[2] JAMES C.2014年全球生物技术/转基因作物商业化發展态势[J].中国生物工程杂志，2015，35（1）：1-14.

[3] 杨生伟.青海省油菜栽培技术现状[J].青海农技推广，2018（3）：66-68.

[4] Center for Environmental Risk Assessment. GM crop database[DB/OL].（2019-09-03）[2019-09-24]. http：//ceragmc.org.

[5] EU GMO Compass.GMO database[DB/OL].[2017-03-01].http：//www.gmocompass.org.

[6] 上海交通大学转基因实验室.转基因检测方法数据库[DB/OL].（2008-10-11）[2019-09-24]. http：//gmdd.shgmo.org.

[7] 张丽，吴刚，曹应龙，等.油料作物内标准基因研究与应用[J].中国油料作物学报，2009，31（4）：544-551.

[8] CABANAS M J，VAZQUEZ D，MODOLELL J.Dual interference of hygro-mycin B with ribosomal translocation and with aminoacylt RNA recognit-ion[J].Eur J Biochem，1978，87（1）：21-27.

[9] 杨烁，郝育杰，兰金苹，等.转基因水稻中HPT蛋白质的检测及表达特征研究[J].中国生物工程杂志，2015，35（6）：61-67.

[10] 张慧军，石跃进，朱永红，等.NPTII标记转基因棉花再生株的延期筛选[J].中国棉花，2002，29（5）：26-27.

[11] 吴霞，王娇娟，朱祯，等.转Bt-CpTI-GNA基因棉花的研究[J].棉花学报，2005，17（6）：353-359.

[12] 中华人民共和国农业部.农业部2031号公告-9-2013，转基因植物及其产品成分检测油菜内标准基因定性PCR方法[S/OL].（2013-12-04）[2019-09-24].https：//www.docin.com/p-1030743868.html.

[13] 中华人民共和国农业部.农业部1782号公告-2-2012，转基因植物及其产品成分检测标记基因NPTII、HPT和PMI定性PCR方法[S/OL].（2016-06-06）[2019-09-24].https：//wenku.baidu.com/view/7df9d f75c381e53a580216fc700abb68a882ad40.html.

[14] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.SN/T 1204-2003，植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法[S/OL].（2003-03-17）[2019-09-24].www.doc88.com/p-8951936282097.html.

[15] 张海波，张英，刘冰，等.玉米中转基因成分筛查策略[J].西北农业学报，2015，24（12）：57-63.