李明显 赵 杰 何青莲 郑广娟 谢兴意 曹 卓 广东省中医院病理科，广东省广州市 510120

病理活检小组织是病理科日常工作中的重要标本来源，由于标本体积小且不同标本之间存在数量差异，传统方法是应用白色包埋纸将组织包裹后进行常规脱水处理，由于包埋纸的折叠层次不易辨识及缺少对组织数量的相关标记，石蜡包埋效率和包埋质量都会受到影响，进而影响病理诊断的准确性。笔者设计了一套彩色包埋纸，采用特殊处理方式应用于胃肠镜活检组织的常规病理技术，经反复实验，证明了病理活检小组织标本应用该方法能够提高石蜡包埋效率和包埋质量。

1 材料与方法

1.1 材料 检测 2019年3—5月我院胃肠镜室行消化道内窥镜检查术中钳取的60例活检标本，每例标本组织数量1～4粒，每粒胃组织标本及肠组织标本直径0.1～0.5cm，所有标本均经规范化取材[1]、独立脱水及浸蜡程序处理，通过区组随机化平均分成两组，即对照组和改进组，每组30例标本，依次编号为1～30。两组均由同一位技师分别应用传统方法与改进方法进行石蜡包埋操作。主要设备耗材：包埋纸，包埋盒(威格斯，广州)，自动脱水机(Thermo，美国)，石蜡包埋机(Thermo，美国)，石蜡切片机(Leica， 德国)，自动染色机(Leica， 德国)。

1.2 方法

1.2.1 传统方法：将胃肠镜活检组织随机放入白色包埋纸内，包埋纸上不记录每例活检组织的数量，该组作为对照组(图1A)，将活检组织用包埋纸折叠[1]后放入包埋盒内，点染伊红后合上盖子，依次脱水、透明、浸蜡、包埋。石蜡包埋过程：打开包埋盒的盖子，拆解包埋纸后逐一收集活检组织并放入包埋模具，按石蜡包埋原则[2-5]进行操作(图2A)，最后将包埋模具移至冷冻台，记录此过程的包埋耗时(即从打开包埋盒至将包埋模具移至冷冻台所消耗的时间)，然后进行石蜡切片及HE染色，并于显微镜下计数每例标本的组织数量。

1.2.2 改进方法：将1～4个活检组织分别放入对应的蓝色、黄色、白色、绿色包埋纸内。标本放置规则：(1)组织数量为1时，应用蓝色包埋纸；(2)组织数量为 2 时，应用黄色包埋纸；(3)组织数量为3时，应用白色包埋纸；(4)组织数量为4时， 应用绿色包埋纸(图1B)。对包埋纸内的活检组织点染伊红并合上盖子，依次脱水、透明、浸蜡、包埋。石蜡包埋过程：打开包埋盒的盖子，拆解包埋纸后逐一收集活检组织并放入包埋模具，按石蜡包埋原则进行操作(图2B)，最后将包埋模具移至冷冻台，记录此过程的包埋耗时，然后进行石蜡切片及HE染色，并于显微镜下计数每例标本的组织数量。

图1 对照组和改进组标本放置示意图A1～A4分别显示对照组中1～4 个组织标本分别放置在不同包埋纸内 B1～B4分别显示改进组中1～4个组织标本分别放置在蓝色、黄色、白色、绿色包埋纸内

图2 对照组与改进组在石蜡包埋过程中包埋纸的折叠状态示意图A示对照组中白色包埋纸的折叠状态 B示改进组中彩色包埋纸的折叠状态

1.3 观察指标 为了明确在常规病理技术中应用彩色包埋纸的使用规则后是否能快速高效地处理石蜡包埋过程中的小组织标本，笔者记录两组包埋耗时，以及石蜡切片并HE染色后显微镜镜检每例标本的数量与实际数量的符合率。

1.4 统计学方法 应用SPSS22.0统计软件进行分析，两组间包埋耗时比较采用t检验，两组间标本数量符合率比较采用χ2检验，P<0.05示差异有统计学意义。

2 结果

两组在石蜡包埋耗时和标本数量符合率方面比较，差异均具有统计学意义(P<0.05)，改进组在病理小组织标本的石蜡包埋效率和包埋质量方面均优于对照组。见表1。

表1 两组胃肠镜组织HE切片制作特点比较

3 讨论

病理活检小组织尤其是胃肠镜活检组织是病理科日常工作中的重要标本来源，由于其体积小且标本间存在数量差异，在常规取材及石蜡包埋过程中给操作者带来一些不便。传统的技术方法是将白色包埋纸包裹小组织后再进行脱水处理，由于包埋纸浸蜡后其折叠层次不易被辨识(图2A)，错误的拆解方式有可能造成包埋纸被撕裂，甚至组织从撕裂的缝隙遗漏，从而影响包埋效率；再者，石蜡包埋过程中由于缺少记录组织数量的同步提示，若仅凭借操作者的经验来判断仍然可能存在与实际组织数量的差异，因为看似“多粒”的组织实际可能是一个形状不规则的息肉，而看似“一粒”的组织实际也可能是几粒相互嵌合在一起的不同组织。从而影响包埋质量，甚至影响病理诊断的准确性。将包埋纸相邻两个角均设计为黑色，其余两个角均设计为紫色，以及将中央区的主体颜色分别设计为蓝色、黄色、白色、绿色，使用这种特殊设计的彩色包埋纸时按照实验中对照组的标本放置规则，就能在石蜡包埋过程中同时提高包埋效率和包埋质量。首先，彩色包埋纸对角错位折叠[1]后在对角处黑色与紫色相互遮挡形成了鲜明的色彩对比效果(图2B)，实验表明彩色包埋纸的这一设计为石蜡包埋过程中快速拆解包埋纸、缩短收集标本耗时提供了视觉上的便利条件；其次，将彩色包埋纸四种不同的中央区主体颜色分别赋予特定的数量对应关系，这种颜色与数量的对应关系是依据红染的小组织标本在不同彩色包埋纸的背景下形成的色彩对比效果具有强弱不等的现象，这样的规则设计也能对提高石蜡包埋效率起到一定辅助作用，而且更为重要的是，根据彩色包埋纸的颜色就能准确核实组织的数量。实验表明彩色包埋纸的这一设计为改进组中标本数量符合率达到100%提供了必要保障。虽然四格小孔径包埋盒在病理活检小组织标本中的应用发挥的作用与之相似，而且比彩色包埋纸在提高工作效率上更出色，但是在实际操作中应用四格小孔径包埋盒时需特别小心，因为在石蜡包埋过程中打开它的盖子时小组织标本可能因盖子的震动而弹出包埋盒，由于组织较小，再次被找回的可能性不大，从而造成无法挽回的工作失误。而彩色包埋纸在石蜡包埋操作过程中由于包埋纸与包埋盒相互粘连的面积较大,很少会发生被弹出的现象，即使包埋纸偶尔被弹出也能够迅速被找到。综合考虑，笔者建议在处理病理活检小组织标本时彩色包埋纸作为首选，配合普通包埋盒即可达到预期目的。

彩色包埋纸同样适用于纤支镜及鼻咽镜等钳取的小组织在常规病理技术中的应用，能够同时提高石蜡包埋效率和包埋质量；应用于细针穿刺活检组织及妇科宫腔镜术中刮取的碎组织在一定程度上也能提高石蜡包埋操作的工作效率，是一种值得推广的新型技术方法。