复配物替代抗生素对肉鸡生长性能、肠道形态、血清生化及抗氧化的影响

2020-02-14李继明

饲料工业 2020年2期

■张扬李继明孟勇孙阳杨滔

（绵阳禾本生物工程有限公司，四川绵阳621000）

在规模化畜禽养殖中，抗生素的使用不仅造成动物体内毒素残留、自身免疫力下降、致病菌产生耐药性，也危害着人类健康。如果生物酶和植物提取物的复合物可以替代抗生素作为畜禽的天然促生长剂，那么将会推动畜牧行业无抗发展。

生物酶是一种高效无污染的催化剂，其本质是蛋白质，在水中高效专一地分解底物。其中葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase,GOD）能专一水解β-D-葡萄糖生成D-葡萄糖酸内酯和过氧化氢，在此过程可消耗动物肠道中氧气，阻止好氧有害菌（大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌等）的增殖，促进厌氧有益菌（双歧杆菌等）的繁殖，同时过氧化氢还有广谱的杀菌作用，杀死有害菌如大肠杆菌、沙门氏菌等，从而保护肠道菌群平衡，促进肠道健康发育，改善肠道形态，进而提高动物的生长性能[1-5]。综上所述，葡萄糖氧化酶具有抑菌促生长的作用，且无毒无抗药性，可以作为一种新型的抗生素替代产品，具有广阔的应用前景[6]。植物提取物是一种从植物中提取的含多种活性成分的混合物，例如生物碱、植物甾醇、植物多酚等。其中植物多酚是分布广、来源丰富、生理功能多样性的多羟基酚类化合物的总称，具有抗氧化、抗衰老、抗菌消炎、抗病毒等生物活性[7]。植物提取物在畜禽上具有提高营养物质利用率、增加体增重、降低料肉比、提高血清抗氧化水平及降低丙二醛等作用[8-10]。以上说明，植物提取物不仅可以改善动物健康和生长性能，也具有替代某些抗生素的作用。

本试验通过在饲粮中添加生物酶和植物提取物的复配物（有效成分：葡萄糖氧化酶和植物多酚）替代抗生素，研究对肉鸡生长性能、肠道形态、血清生化及抗氧化指标的影响，为肉鸡养殖提供试验数据和理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验用复配物由绵阳禾本生物工程有限公司提供，有效成分为生物酶（主要成分：葡萄糖氧化酶，酶活10 000 U/g）和植物提取物（主要成分：植物多酚，含量≥98%），添加量为300 g/t（0.03%）。

1.2 试验设计与试验动物

试验采用单因素试验设计，将600只一日龄Ross 308肉鸡随机分为3个处理，每个处理10个重复，每个重复20只鸡，试验周期为35 d。T1饲喂基础日粮；T2饲喂基础日粮+抗生素（恩拉霉素添加量为0.013%）；T3饲喂基础日粮+0.03%复配物。试验设计见表1。

表1 试验设计

1.3 试验日粮

试验基础日粮采用玉米-豆粕型，参照中国鸡饲养标准（2004），根据肉鸡营养需要标准配制，前期1～21 d，后期22～35 d ，均使用颗粒料，抗生素及复配物替代等量膨润土添加到基础日粮中。基础日粮组成及其营养水平见表2。

1.4 饲养管理

试验于某大型肉鸡养殖基地进行。试验动物为网上笼养，在试验前鸡舍和笼具进行清洗，再用1%的氢氧化钠溶液对鸡舍和笼具进行消毒，24 h后经清水冲洗干净，然后用福尔马林和高锰酸钾（每立方米加30 ml福尔马林，15 g高锰酸钾）对鸡舍、料盘、料桶和饮水设备进行48 h熏蒸消毒，鸡舍通风5 d后，开始试验。入雏前24 h将圈舍升温至32～35 ℃，此后温度每周大约降低2～3 ℃，直至保持在20～22 ℃为止，鸡舍相对湿度保持在40%～50%。试验期间，根据肉鸡精神状况合理调节温度和湿度。24 h连续光照，参照白羽肉鸡的日常饲养管理，先饮水后开食，自由采食和饮水。饲养过程中，注意监测环境空气质量，注意通风换气，保持良好的鸡舍环境；每天打扫鸡舍清洁卫生，并定期用百毒杀对鸡舍进行喷雾消毒。参照常规免疫程序进行免疫接种。

表2 基础日粮组成及营养水平

1.5 考察指标

1.5.1 生长性能

分别于试验第1、21、35 d 以重复为单位称重，提前12 h 断料。计算各阶段体重（BW）、平均日增重（ADG）。记录饲料的添加与损耗情况，结算各阶段采食量，计算平均日采食量（ADFI）。最后根据采食量和体增重计算各阶段料重比（F/G）。

F/G=阶段鸡只采食量/（阶段末重+死亡淘汰鸡体重-阶段初重）

平均日采食量（ADFI）=总采食量/天数

平均日增重（ADG）=（末重-始重）/天数

1.5.2 肠道形态

分别于21 d 和35 d 时，每个重复选取2 只处死，分离各肠道后，在十二指肠、空肠和回肠中部各截取2.0 cm 组织样，分别处理分类放入10%多聚甲醛溶液中浸泡保存，固定24 h 以上。将已经固定好的组织进行洗涤、脱水、透明、透蜡、包埋、修块、切片、苏木素-伊红（HE）染色及封片，烘干后显微镜下观察肉鸡肠黏膜形态结构，并应用Image-Pro Plus 6.0 专业图像分析软件测量肉鸡十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度和隐窝深度，并计算绒毛高度和隐窝深度比值（V/C）。

1.5.3 血清生化、抗氧化指标

在试验第21、35 d从每个重复另选一只体重接近平均体重的鸡只，颈静脉采血15 ml 于4 ℃条件下4 000 r/min 离心15 min，取上层血清分为两份，一份直接送医院检测血清生化指标，选用上海科华公司试剂盒，上海科华卓越310型全自动分析仪分析。检测的血清生化指标有白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、球蛋白（GLB）、谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（AST）、肌酐（Cre）、尿酸（UA）。

另一份血清于-20 ℃保存待检血清抗氧化指标，血清抗氧化能力包括：谷胱甘肽过氧化氢酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD），测定方法利用南京建成生物研究所的试剂盒进行测定。

1.6 统计分析

试验数据采用Microsoft Excel 进行初步统计，SPSS 19.0 软件统计分析，采用GLM 程序进行单因素方差分析，数据用“平均值和标准误”表示，以P≤0.05为差异显著。

2 试验结果

2.1 复配物替代抗生素对肉鸡生长性能的影响（见表3）

由表3 可知，与T1 相比，T2、T3 显著提高肉鸡1～21 d平均日增重（P＜0.05），显著降低1～21、22～35 d和1～35 d 料重比（P＜0.05），对22～35 d 和1～35 d 平均日增重及各阶段平均日采食量无显著影响（P＞0.05）。且T2和T3各阶段生长性能均无显著差异。

表3 复配物替代抗生素对肉鸡生长性能的影响

2.2 复配物替代抗生素对肉鸡肠道形态的影响（见表4）

由表4可知，与T1相比，T2和T3显著增加21 d肉鸡十二指肠的绒毛高度和绒隐比（P＜0.05）；T3显著提高21 d肉鸡空肠绒毛高度和绒隐比（P＜0.05）；T3显著提高35 d肉鸡空肠绒隐比（P＜0.05）；试验处理对回肠肠道形态无显著影响（P＞0.05）。

2.3 复配物替代抗生素对肉鸡血清生化指标的影响（见表5）

由表5可知，与T1相比，T2和T3显著增加21 d血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、肌酐含量以及35 d球蛋白含量(P＜0.05)，对35 d各组间血清总蛋白、白蛋白、肌酐、谷草转氨酶、谷丙转氨酶和尿酸含量无显著差异（P＞0.05）。且T2与T3各项指标间无显著差异（P＞0.05）。

表4 复配物替代抗生素对肉鸡肠道形态的影响

2.4 复配物替代抗生素对肉鸡抗氧化能力的影响（见表6）

由表6可知，与T1相比，T2和T3显著提高21 d血清谷胱甘肽过氧化物（GSH-Px）酶活性，并且显著降低了丙二醛（MDA）的含量(P＜0.05)，对35 d 血清GSH-Px活性与MDA、SOD含量无显著影响（P＞0.05），T2和T3无显著差异（P＞0.05）。

3 讨论

3.1 复配物替代抗生素对肉鸡生长性能的影响

刘庆兵[11]在肉鸭饲粮中添加葡萄糖氧化酶显著提高了21、39 d 试验鸭体重以及各阶段体增重，并显著降低各阶段肉鸭料重比。李焰[1]研究认为饲粮中添加0.15%葡萄糖氧化酶可降低肉鸡料重比（降低6.25%）；在饲粮中添加0.1%葡萄糖氧化酶即可替代10 mg/kg 氨苄青霉素且不影响其生长性能。陈清华等[12]在断奶仔猪饲粮中添加200 g/t 葡萄糖氧化酶替代0.1%的金霉素，结果显示葡萄糖氧化酶和金霉素均可显著提高断奶仔猪的平均日增重，且两者效果相当。汤海鸥等[6]研究葡萄糖氧化酶替代抗生素对肉鸡生长性能的试验表明，添加200、400 g/t葡萄糖氧化酶替代常规饲粮中抗生素后，其生长性能与常规饲粮组无显著差异，说明，葡萄糖氧化酶可以替代抗生素。武进等[13]研究植物提取物对生长育肥猪的影响发现，添加600 g/t 和800 g/t 植物提取物可显著增加生长育肥猪日增重。本试验结果与上述研究结果一致。本试验以肉鸡为研究对象，通过在饲粮中添加300 g/t复配物替代0.013%恩拉霉素，结果表明，添加复配物可显著改善无抗生素组的生长性能，且可与抗生素组无显著差异，说明本试验条件下，300 g/t 复配物可完全替代0.013%恩拉霉素的效果。

表5 复配物替代抗生素对肉鸡血清生化指标的影响

表6 复配物替代抗生素对肉鸡抗氧化能力的影响

3.2 复配物替代抗生素对肉鸡肠道形态的影响

肠黏膜的绒毛高度和隐窝深度代表着它的吸收能力，绒毛高度越高，隐窝深度越浅其吸收能力越好，直观体现在绒隐比，比值越大吸收越好。陈清华等[12]在断奶仔猪饲粮中添加200 g/t 葡萄糖氧化酶替代0.1%的金霉素，发现可显著提高断奶仔猪十二指肠和空肠绒毛高度及VH/CD。宋海彬等[14]发现，饲粮中添加葡萄糖氧化酶可提高肉鸡十二指肠和空肠绒毛高度、降低隐窝深度和增加绒毛高度/隐窝深度（V/C）。产生这些结果的原因可能是葡萄糖氧化酶水解底物葡萄糖酸经发酵生成乙酸、丙酸、丁酸等短链脂肪酸，短链脂肪酸具有易消化吸收、可提高绒毛高度和降低隐窝深度等优点[3]。饲粮中添加500 mg/kg和1 000 mg/kg的植物多酚后，黄羽肉鸡的回肠绒隐比显著高于抗生素组和基础饲粮组，有效改善肠道结构[15]。本试验结果与前人报道结果一致。本试验研究表明，使用复配物替代抗生素可显著改善无抗生素导致的21 d 肉鸡十二指肠的绒毛高度和绒隐比显著降低的负面效应。结果说明添加复配物能有效的改善肠道结构，促进养分的消化吸收。

3.3 复配物替代抗生素对肉鸡血清生化指标的影响

Tancin 等[16]研究发现，机体血清TP、ALB 含量有一定升高，可增强能量动员和体液免疫功能。宋海彬[4]研究表明，肉鸡中添加葡萄糖氧化酶能提高血清总蛋白和白蛋白的含量，降低血清尿素氮的水平。赵国先等[17]在蛋鸡上的研究表明，添加葡萄糖氧化酶可显著提高血清总蛋白和白蛋白含量，显著降低肌酸激酶的活性。侯振平等[18]在断奶仔猪日粮中添加180 U/kg 的葡萄糖氧化酶能显著提高白蛋白和尿素氮的含量。本试验结果与前人报道结果一致。本试验研究表明，使用复配物替代抗生素后，肉鸡21 d 和35 d 的血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、肌酐、谷草转氨酶、谷丙转氨酶和尿酸含量均无显著差异，这也说明，复配物足以替代抗生素，提高机体蛋白质的代谢和动物免疫力。

3.4 复配物替代抗生素对肉鸡抗氧化能力的影响

机体内酶类氧自由基清除剂SOD 和GSH-Px 构成酶促抗氧化体系，总抗氧化能力（T-AOC）代表体内酶性和非酶性抗氧化物的总体水平，MDA 是脂质过氧化的代谢产物，间接反映氧自由基对细胞的损伤程度，当机体内自由基增多，机体组织将使内源性抗氧化剂系统活力增强，防止自由基损伤产生[19]。侯振平等[18]在断奶仔猪上的研究表明，饲粮中添加葡萄糖氧化酶能显著提高仔猪血清SOD 活性，显著降低MDA的含量；宋海彬[4]发现葡萄糖氧化酶不同程度地提高了肉鸡血清SOD活性，降低了血清MDA含量，具有一定抗氧化和抗应激作用。葡萄糖氧化酶水解葡萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢，此过程中消耗氧气清除氧自由基，从而提高机体抗氧化力，降低脂质过氧化物的产生。饲粮中添加500 mg/kg 和1 000 mg/kg 的植物多酚后，21 d肉鸡血清中过氧化氢酶的活性显著高于抗生素组[15]。本试验研究表明，使用复配物替代抗生素可显著改善无抗生素导致的21 d 肉鸡血清谷胱甘肽过氧化物酶活性降低和丙二醛含量升高的负面效应。这与前人的研究结果一致，说明本试验使用的复配物具有改善机体抗氧化能力的作用。