张珍妮

（广西医科大学附属武鸣医院，广西 南宁 530100）

目前肝癌发病率和死亡率仍有升高趋势，仍有大部分肝癌病人未能得到及时救治。研究表明，信号通路的激活与抑制，对肿瘤的生物行为有着重要影响[1]。近年来sonic Hedgehog信号通路以及CD90分子在肝癌发生、发展中的初步研究探索表明sonic Hedgehog信号通路以及CD90分子各自在肝癌发生、发展中起到一定调控作用，但两者是否存在关联尚不清楚。本次研究通过CD90在C57BL6J小鼠肝癌发生过程中Shh阻断组和未阻断组的表达情况探讨sonic Hedgehog信号通路对CD90分子的表达有无调控作用。

1 资料与方法

1.1 主要试剂

TRIzol Reagent RNA提取试剂（杭州沃森生物技术有限公司），逆转录试剂盒（上海玉博生物技术有限公司），荧光定量PCR仪（MJR公司）。实验引物分析的基因序列来自于Genbank。蛋白裂解液、BCA蛋白定量试剂盒及蛋白印记实验发光底物试剂盒（碧云天生物技术公司）；CD90单克隆抗体、Smo兔抗鼠多克隆抗体（美国millipore公司），β-actin单克隆抗体（康成生物公司）；辣根过氧化酶标志羊抗鼠IgM（北京博尔西公司）；环耙明（cyclopamine）（美国selleckchem）。

1.2 DEN/CCl4等联合诱发C57BL/6J小鼠原发性肝癌

C57BL/6J雄性小鼠100只，以DEN/CCl4/Ethanol等联合诱发小鼠肝癌。实验组（诱癌组）分为Shh阻断组和未阻断组，每小组随机选取40只小鼠；对照组中20只小鼠以正常颗粒饲料喂养。为了观察肿瘤形成不同阶段的肝癌干细胞分子CD90的变化规律及Shh信号通路相关分子（Smo基因及其相关蛋白）对CD90表达水平的调控情况，每2周各小组分别处死4只老鼠，获取组织学和细胞学标本，然后进行相关指标检测和分析，20周诱癌成功后处死全部小鼠。……