舒艳梅，杨兴娜，王金梁

特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是一种局限于肺部的慢性进行性纤维化性间质性肺炎［1］，其组织病理学和/或胸部高分辨率CT 特征性表现为寻常型间质性肺炎（UIP），主要病理表现为弥漫性肺泡损伤和肺泡结构紊乱，最终导致肺泡结构破坏，形成肺纤维化和蜂窝肺。IPF 患者主要临床表现为刺激性干咳、进行性加重的呼吸困难等，少数患者表现为逐步、可预见性的肺功能下降，极少数患者病情呈快速进行性发展。近年来IPF 发病率呈逐年上升趋势，致残率、病死率较高，预后较多种癌症更差，中位生存时间为2.8～4.2 年，肺移植后中位生存时间约为4.5 年，5 年生存率约为20%，故被称为“类肿瘤疾病”［2］。据报道，欧洲和北美地区IPF 发病率为（2.8～9.3）/10 万［3］。

目前，临床尚无能有效逆转肺纤维化过程的药物。近年来，多项研究表明IPF 患者常合并胃食管反流（gastroesophageal reflux disease，GERD）［4-7］，而GERD所致的反复微小吸入可能与IPF 发生有关，肺部微生态相关机制研究也提到GERD 是IPF 的危险因素之一［5］。HAN 等［8］研究结果显示，约56.4%的IPF 患者存在GERD。MOLYNEAUX 等［9］学者发现，IPF 急性加重患者多表现为弯曲杆菌属增多，而弯曲杆菌属主要来自消化道，推测可能是由于消化系统内容物的潜在微小误吸所致。但多数IPF 患者为“隐性反流”，GERD 的临床症状并不明显，因此易被漏诊或误诊。近年来随着24 h食管pH 监测仪应用于临床，人们逐渐发现GERD 可能对IPF 产生影响。2011 年，LEE 等［10］通过回顾性分析204 例IPF 患者病例资料发现，抑酸治疗与IPF 患者生存时间延长有关，但目前其具体作用机制尚未完全明确。本研究旨在探讨抑酸治疗对肺纤维化大鼠的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 2017-06-21 至2017-08-17，选取36只普通级雄性健康SD 大鼠，体质量150～200 g，由河南科技大学模式动物研究室提供，普通环境饲养。

1.2 主要试剂 博来霉素试剂（河南天池生物科技有限公司生产），醋酸泼尼松（哈药集团制药四厂生产，国药准字H23020185），盐酸雷尼替丁（阿特维斯制药有限公司生产，国药准字H44021231），丙二醛（malondialdehyde，MDA）试剂盒（南京建成生物工程研究所生产），乌拉坦溶液（河南科技大学模式动物研究室提供），盐酸溶液（河南科技大学模式动物研究室提供）。

1.3 分组及造模 将36 只健康雄性SD 大鼠随机分为对照组（n=10）、肺纤维化组（n=6）、雷尼替丁组（n=10）及泼尼松组（n=10）。肺纤维化组、雷尼替丁组及泼尼松组大鼠均一次性经鼻滴入博来霉素7 μg/g 建立肺纤维化模型［11］，对照组大鼠经鼻滴入相同剂量0.9%氯化钠溶液。造模后，雷尼替丁组大鼠予以盐酸雷尼替丁30 mg·kg-1·d-1连续灌胃28 d［12］，泼尼松组大鼠予以醋酸泼尼松6 mg·kg-1·d-1［13］连续灌胃28 d，对照组大鼠予以相同剂量0.9%氯化钠溶液连续灌胃28 d。造模后7 d 随机选取肺纤维化组1 只大鼠处死，造模后14 d 随机选取肺纤维化组1 只大鼠处死，造模后28 d 将肺纤维化组剩余4 只大鼠全部处死，行肺组织病理切片观察肺纤维化情况以验证是否造模成功。

1.4 观察指标

1.4.1 取材 造模后28 d，四组大鼠均采用20%乌拉坦溶液（5 ml/kg）腹腔注射麻醉，经腹主动脉抽取动脉血检测血清MDA 水平及动脉血氧分压（PaO2）；腹主动脉放血处死大鼠，开胸取出肺组织后用0.9%氯化钠溶液漂洗数次，采用4%多聚甲醛液固定肺组织，常规石蜡包埋，进行HE 染色。

1.4.2 肺纤维化严重程度 结合肺组织HE 染色结果，按照SZAPIEL 等［14］提出的方法评估肺纤维化严重程度，肺纤维化严重程度判定标准见表1。

表1 肺纤维化严重程度判定标准Table 1 Criteria for severity of pulmonary fibrosis

1.4.3 血清MDA 水平 取大鼠腹主动脉血，4 000 r/min离心10 min（离心半径13.5 cm），留取血清并置于-20 ℃环境下保存待测，采用TBA 法配制试剂，严格按照MDA 试剂盒说明书进行操作。

1.4.4 PaO2采用经低分子肝素钙肝素化的注射器抽取大鼠腹主动脉血，顶端使用肝素帽封闭，冷藏环境下15 min 内送至河南科技大学第一附属医院神经内科重症监护室，采用美国雅培I-STAT1300-G 型血气分析仪检测PaO2，以评估肺氧合功能。

1.5 统计学方法 采用SPSS 20.0 统计软件进行数据分析，计量资料以表示，多组间比较采用单因素方差分析；计数资料分析采用χ2检验；等级资料分析采用秩和检验。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肺组织病理学特征 HE 染色结果显示，对照组大鼠肺组织结构正常，肺泡腔透亮，无明显充血水肿，肺泡壁薄，肺泡内未见明显渗出，未见明显急慢性炎性改变及纤维化表现，肺纤维化严重程度（-），见图1A。肺纤维化组大鼠造模后7 d 部分肺泡腔内可见少量渗出及炎性细胞浸润，肺纤维化严重程度（+），见图1B；造模后14 d 有较多肺组织内可见炎性细胞浸润和少量胶原沉积，肺纤维化严重程度（++），见图1C；造模后28 d，肺组织内可见大量炎性细胞浸润，肺泡壁增厚，肺泡间隔增宽，肺泡腔内有大量成纤维细胞增殖及胶原沉积，肺纤维化严重程度（+++），见图1D，提示造模成功。造模后28 d，雷尼替丁组和泼尼松组大鼠肺泡炎性反应及纤维化严重程度均较肺纤维化组减轻，见图1E～1F。

2.2 肺纤维化严重程度、血清MDA 水平及PaO2实验过程中雷尼替丁组1 只大鼠死亡，泼尼松组3 只大鼠死亡。造模后28 d 四组大鼠肺纤维化严重程度及血清MDA 水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；肺纤维化组、雷尼替丁组、泼尼松组大鼠肺纤维化严重程度劣于对照组，血清MDA 水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；雷尼替丁组、泼尼松组大鼠肺纤维化严重程度优于肺纤维化组，血清MDA 水平低于肺纤维化组，差异有统计学意义（P＜0.05）。造模后28 d四组大鼠PaO2比较，差异无统计学意义（P＞0.05，见表2）。

表2 四组大鼠造模后28 d 肺纤维化严重程度、血清MDA 水平及PaO2比较Table 2 Comparison of severity of pulmonary fibrosis，serum MDA level and PaO2 in the four groups 28 days after modeling

3 讨论

图1 四组大鼠肺组织病理学特征（HE 染色，×400）Figure 1 Pathological features of pulmonary tissue in the four groups

IPF 是特发性间质性肺炎的常见类型，常起病隐匿，好发于中老年人群，临床症状轻重不一，大多数患者表现为缓慢、逐步、可预见的肺功能下降；少数患者反复发生急性加重；极少数患者表现为进行性加重的呼吸困难，可严重影响患者的生活质量。IPF 的主要病理表现为明显纤维化或结构改变，伴或不伴有蜂窝肺，肺间质内胶原过度沉积和纤维母细胞过度增殖，斑片状肺实质纤维化和成纤维细胞灶形成。目前，IPF 的具体发病机制尚未完全明确，且尚无能有效逆转肺纤维化过程的药物。

糖皮质激素是治疗IPF 的经典药物，能抑制多种免疫效应细胞功能及各种细胞因子的合成、分泌，从而减轻IPF 患者肺泡炎症及纤维化，改善患者临床症状，常用于IPF 急性加重期；此外，糖皮质激素还可通过选择性诱导肺内炎性细胞凋亡而改善博来霉素所致肺纤维化模型大鼠肺泡炎性反应及肺纤维化程度［15］。

近年来，多项研究表明IPF 患者常合并GERD，而GERD 所致的反复微小吸入可能与IPF 发生有关［4-7］，提示GERD 可能是IPF 的潜在病因。抑酸治疗可能会延长IPF 患者生存时间，但具体机制尚未完全明确。雷尼替丁是临床常见的抑酸药物，其可有效缓解胃酸过多所致的胃痛、胃灼热感、反酸等，常用于全身麻醉或大手术后及衰弱昏迷患者预防胃酸反流合并吸入性肺炎。本研究选用雷尼替丁作为抑酸药物，结果显示，肺纤维化组、雷尼替丁组、泼尼松组大鼠肺纤维化严重程度劣于对照组，雷尼替丁组、泼尼松组大鼠肺纤维化严重程度优于肺纤维化组；HE 染色结果显示，造模后28 d 雷尼替丁组和泼尼松组大鼠肺泡炎性反应及纤维化严重程度均较肺纤维化组减轻，提示抑酸治疗能在一定程度上减轻肺纤维化大鼠肺纤维化严重程度，与糖皮质激素作用相似。

正常生理条件下，自由基在机体内分布较为广泛，仅极少量自由基与氧结合转变成氧自由基而参与机体生理反应、生化反应、免疫反应等；此外，氧自由基还能与不饱和脂肪酸相互作用而使脂质微循环紊乱，导致细胞膜通透性和完整性遭到破坏，进而引起细胞结构及功能改变，最终形成脂质过氧化物。MDA 是过氧化脂质的主要代谢产物，其水平变化可直接反映组织中脂质过氧化程度及间接反映氧自由基含量［16-18］，此外还可衡量机体氧化应激反应程度［19-20］。本研究结果显示，造模后28 d 肺纤维化组、雷尼替丁组、泼尼松组大鼠血清MDA 水平高于对照组，雷尼替丁组、泼尼松组大鼠血清MDA 水平低于肺纤维化组，提示抑酸治疗能在一定程度上减轻肺纤维化大鼠脂质过氧化反应，与糖皮质激素作用相似。PaO2是评估肺氧合功能的临床指标之一。本研究结果显示，造模后28 d 四组大鼠 PaO2比较无统计学差异，提示抑酸治疗对肺纤维化大鼠肺氧合功能无明显影响，分析其原因可能与样本量较小、实验条件及实验周期有限有关。

综上所述，抑酸治疗能在一定程度上减轻肺纤维化大鼠肺纤维化严重程度及脂质过氧化反应，但对肺氧合功能无明显影响，与糖皮质激素作用相似；但本研究为动物实验，仅提供了初步实验数据；此外，肺纤维化发病机制较为复杂，因此抑酸治疗对肺纤维化的影响仍有待进一步研究证实。

作者贡献：舒艳梅、杨兴娜、王金梁进行文章的构思与设计；舒艳梅、杨兴娜进行研究的实施与可行性分析，进行数据收集、整理、分析；舒艳梅进行结果分析与解释，负责撰写论文；舒艳梅、王金梁进行论文的修订；王金梁负责文章的质量控制及审校，对文章整体负责，监督管理。

本文无利益冲突。