郑州大学附属儿童医院 河南省儿童医院 郑州儿童医院（450000）谢博

1 材料和方法

1.1 材料 恒温水浴锅为DZKW-S-8型、德国IKA的MS3型旋涡混合器、TAL-40D型试管恒温仪、Eppendorf移液器、Thermo Fisher Scientific公司的OMH180SS型高温烘箱等。实验使用的所有玻璃器皿在250℃下烘烤2小时以除去外源细菌内毒素。

TAL：TALⅠ是厦门迅试剂实验厂有限公司的产品，批号：1505804，灵敏度为0.25EU/mL；TALⅡ是湛江安得生物有限公司的产品，批号：1607062，灵敏度为0.25EU/mL。

内毒素工作标准品（CSE）买自北京世纪奥科生物技术有限公司，规格：每支80EU，批号：150601-201478。

BET水购自上海恒远生物科技有限公司，规格：10mL每支，产品编号：160006。

注射用VRC：来自四川美大康华康药业，批号为：16061319、15121119，规格：每瓶0.1g。

1.2 方法 根据临床使用情况对细菌内毒素的限值进行测定，使用剂量：本产品静脉滴注速度最快不得＞3mg/（千克/时），将其稀释后需要进行1～2小时的滴注，极限值为1.67EU/mg。严格限制在计算值的1/3～1/2之间，以确保安全使用药物，并结合现行标准和相关要求，暂且认为VRC的细菌内毒素应不得高于0.75EU/mg。

本研究根据2015版中华人民共和国药典中的药剂敏感度审查规则对TAL进行试剂敏感性审查。

笔者通过预干扰实验发现选用0.25EU/mL的TAL时，将注射用VRC稀释到0.67mg/mL时不存在BET干扰。因此，我们将样品稀释到测试溶液A的0.67mg/mL，并采用该稀释液和BET水分别将标准品稀释，浓度为含内毒素2、1、0.5、0.25λ的溶液B、C。BET可直接作为阴性对照D。准备工作完成后进行干扰试验检查，溶液B各个浓度设置4个平行管，溶液A、C、D的各个浓度设置2个平行管。

供试品BET：根据建议的BET标准检查所有样品。溶液A：将样品稀释至0.67mg/mL，并选择λ=0.5EU/mLTAL进行BET。……