雷刘燕，周丽红，吴晓薇，周淑君

(丽水市中心医院妇产科，浙江 丽水 323000)

子痫前期是指妊娠前血压正常的孕妇在妊娠20孕周后，以孕妇出现蛋白尿及高血压为特征的妊娠期特发性疾病，其发病率可高达8%，是导致孕妇和胎儿死亡的重要因素，但其发病机制目前尚未明确[1]。有关文献报道，脂联素具有抗炎、改善机体胰岛素抵抗、抗动脉粥样硬化的作用，对重度子痫前期等多种疾病的发生发展具有一定的保护作用[2]。胎儿从母体获取营养的唯一途径是脐动脉，因此通过检测脐动脉阻力指数(umbilical artery resistance index，UA-RI)、脐动脉搏动指数(umbilical artery pulsatility index，UA-PI)及脐动脉收缩期和舒张期血流比值(umbilical arterysystolic/diastolic ratio，UA-S/D)可充分了解胎盘-胎儿循环有无出现病变及病变严重程度。有关研究显示，通过实时监测脐动脉超声血流变化可显著降低高危孕妇及围产儿的死亡率[3]。因此，本研究对正常足月妊娠产妇和重度子痫前期孕妇的胎盘组织进行分析，旨在探讨重度子痫前期孕妇胎盘组织脂联素表达水平与胎儿脐动脉超声血流指数对围产儿结局的预测价值，为重度子痫前期的临床诊断和治疗提供重要的观察指标及血流动力学判断依据。

1资料与方法

1.1研究对象

随机选取2015年6月至2017年1月在丽水市中心医院就诊的54例正常足月妊娠产妇为对照组，54例重度子痫前期孕妇为研究组。研究组纳入标准：①孕妇符合重度子痫前期的相关诊断标准[4]；②单胎，年龄≥18岁；③自愿签署知情同意书。排除标准：①妊娠前合并严重高血压、糖尿病、冠心病等基础疾病；②合并严重肝肾功能不全；③胎儿畸形或多囊卵巢综合征者。对照组纳入标准：于本院定期产检，足月妊娠；单胎，年龄≥18岁。排除标准：伴有妊娠并发症或合并症；既往伴有严重急慢性疾病；伴有胎儿发育不全或先天性疾病等。

1.2研究方法

1.2.1收集资料及脐动脉血流的检测

收集两组孕妇的年龄、孕次、产次、分娩孕周、孕前身体质量指数(body mass index，BMI)及新生儿体重、身长、胎盘重量等资料。通过GE Vivid7彩色多普勒超声仪监测两组孕妇分娩前一天胎儿的脐动脉血流情况，探头频率为3.5MHz，取容积<2mm，脐动脉与脉冲多普勒取样线间夹角为60°，选择5个清晰脉冲频，检测胎儿的UA-RI、UA-PI、UA-S/D。

1.2.2胎盘的取材

于产妇娩出胎盘后切取一块1.0cm×1.0cm×1.0cm的组织，采用0.9%NaCl溶液清洗干净后，采用10%甲醛溶液固定，包埋，切片，用于检测胎盘组织中脂联素蛋白的表达水平。另切除一块0.5cm×0.5cm×0.5cm的新鲜胎盘组织，采用0.9%NaCl溶液清洗干净后，于-80℃的冰箱保存，用于检测胎盘组织中脂联素mRNA相对表达量。

1.2.3脂联素蛋白表达的检测

采用免疫组织化学法检测胎盘组织中脂联素蛋白的表达情况。通过兔抗人脂联素多克隆抗体(由上海闪晶分子生物科技有限公司提供)对胎盘组织行SP染色。通过奥林巴斯荧光显微镜(由上海赖氏电子科技有限公司提供)采集照片。若滋养细胞中的细胞质或细胞膜呈现黄褐色颗粒或棕黄色颗粒为阳性表达。选择5个视野观测组织细胞，并计算平均光密度值。

1.2.4脂联素mRNA表达的检测

采用定量聚合酶联反应(real-time polymerasechain reaction，PCR)检测脂联素蛋白mRNA的表达情况。通过RNA提取试剂(由深圳市康初源有限公司提供)提取总RNA，完成逆转录后，通过燃料法行定量PCR检测。本研究中的各种引物均由北京万生优达生物科技有限公司提供。以2-△△Ct值对目的基因相对表达量进行定量分析。

1.3统计学方法

2结果

2.1两组孕妇和围产儿的一般资料比较

研究组孕妇年龄、孕前BMI均较对照组高(均P<0.01)；研究组孕妇分娩孕周显著低于对照组(P<0.01)；研究组胎盘重量、新生儿出生体重均较对照组低(均P<0.01)，身长较对照组短(P<0.01)；两组的孕次、产次比较差异均无统计学意义(均P>0.05)，见表1。

2.2两组胎儿脐动脉血流参数的比较

研究组UA-RI、UA-PI及UA-S/D均较对照组高(均P<0.01)，见表2。

表1 两组孕妇和围产儿一般资料的比较结果

表2 两组胎儿脐动脉血流参数的比较结果

2.3两组孕妇胎盘组织中脂联素mRNA、蛋白表达的比较

研究组孕妇胎盘组织中脂联素mRNA和蛋白表达水平均较对照组明显升高(均P<0.01)，见表3。

表3 两组孕妇胎盘组织中脂联素mRNA和蛋白表达的比较结果

2.4相关性分析

研究组脂联素mRNA表达量与发病孕周、新生儿出生体重及分娩孕周均呈负相关(均P<0.01)，与UA-S/D及孕前BMI均呈正相关(均P<0.01)，见表4；研究组UA-S/D与发病孕周、新生儿出生体重及分娩孕周均呈负相关(均P<0.01)，见表5。

表4 脂联素mRNA表达量的相关性分析

表5 UA-S/D的相关性分析

3讨论

3.1子痫前期的病理机制

关于子痫前期的病理机制目前虽尚未明确，然而有研究指出子宫动脉扩张障碍及滋养细胞侵入不足均可增加子宫胎盘循环阻力，导致胎盘灌注不足，出现缺血缺氧的情况，降低系统性血管内皮功能，出现高血压、蛋白尿等临床症状[5]。

3.2脂联素与重度子痫前期发病的相关性

脂联素是一种存在于脂肪组织且含量丰富的蛋白因子，对妊娠期孕妇具有较好的保护作用，同时具有抗炎、改善机体胰岛素抵抗、抗动脉粥样硬化的作用，其在脂肪酸氧化与血糖代谢等过程中发挥着重要作用[6]。由于子痫前期与血管内皮炎症反应、损伤及胰岛素抵抗等关系密切，故脂联素可作为研究子痫前期发病机制的重要蛋白因子之一。有关文献报道，通过脂联素可诱导一氧化氮及血管内皮氧化酶的分泌，参与到子痫前期的发病过程中，而24孕周至孕足月期间，脐血中脂联素的表达水平显著高于母血，可见脂联素的主要来源是胎盘[7]。

本研究发现，两组的脂联素蛋白在胎盘组织绒毛细胞中均有表达，且主要分布在胎盘绒毛滋养层细胞中，但是研究组孕妇胎盘组织中脂联素蛋白表达量(0.34±0.11)较对照组(0.11±0.03)高，推测与缓解机体内炎症反应相关。研究组孕妇胎盘组织中脂联素mRNA表达量(4.12±1.33)较对照组(1.09±0.32)高，可见脂联素高表达于重度子痫前期孕妇胎盘组织中。有研究报道，当重度子痫前期患者的血清脂联素下降时，可有效提高其生存率[8]。另有研究发现，重度子痫前期患者的血清脂联素是上升的，这是由于患者为降低机体内堆积过多脂肪产生的一种应激反应[9]。本研究发现，研究组脂联素mRNA表达量与发病孕周、新生儿出生体重及分娩孕周均呈负相关，与UA-S/D及孕妇BMI均呈正相关，其原因可能是脂联素诱导胎盘组织分泌相应的受体，调节葡萄糖代谢机制，改善胰岛素抵抗，从而影响宫内胎儿的生长发育。

3.3脐动脉超声血流指数异常与重度子痫前期发病的相关性

重度子痫前期是造成围产儿不良结局的致病因素之一。目前临床上主要通过彩色多普勒超声检测胎儿脐动脉血流情况，以加强对重度子痫前期围产儿的监测，减少剖宫产、引产的发生率，提高围产儿的生存率。目前临床上主要通过检测UA-RI来评估胎盘血流灌注情况。本研究通过检测胎儿UA-RI、UA-PI、UA-S/D来监测脐动脉血流情况，发现研究组的UA-RI、UA-PI及UA-S/D均较对照组高，且研究组脂联素mRNA表达量与UA-S/D及孕妇BMI均呈正相关；研究组UA-S/D与发病孕周、新生儿出生体重及分娩孕周均呈负相关，其原因可能是子痫前期损伤血管内皮功能，引发胎盘绒毛小动脉发生痉挛、血管腔狭窄、水肿及梗死，导致胎盘绒毛毛细血管面积显著下降，影响胎盘的正常功能，减少了脐动脉舒张末期血流量，使UA-RI升高，引发子宫肌层及蜕膜层血管硬化，进而出现大片胎盘绒毛水肿及胎盘小叶梗死，减少营养供给，从而影响宫内胎儿的生长发育。

综上所述，重度子痫前期孕妇胎盘组织的脂联素mRNA、蛋白表达量及胎儿脐动脉超声血流指数均显著增加，提示围产儿产生不良结局几率较大。重度子痫前期孕妇分娩孕周较正常妊娠孕妇明显下降，而胎儿脐动脉超声血流指数与孕周密切相关。因此胎儿脐动脉超声血流指数异常是因重度子痫前期孕妇孕周下降引起的，亦或是因重度子痫前期的发病而引起，目前仍未完全明确，需今后排除孕周的影响以进一步分析。