张柏林 刘宁 王双双

摘要：通过建立快速大豆凝集素（SBA）粗提液制备方法，利用N-乙酰-D-半乳糖胺-epoxy-Sepharose 6B亲和层析制备体系制备大豆凝集素样品，采用聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）及红细胞凝集试验分别对本试验制备的大豆凝集素进行纯度及凝集活性的检测。结果表明，试验制备的大豆凝集素的产率为135 mg/100 g;所制得的大豆凝集素样品的纯度较高，与大豆凝集素标准品基本一致;其凝集活性为256。研究成果可为大豆凝集素的量化生产提供技术参考。

关键词：大豆凝集素;分离纯化;亲和层析;凝集活性

中图分类号：S816.4   文献标志码： A  文章编号：1002-1302（2019）12-0221-03

大豆凝集素粗提液的制备一般采用硫酸铵逐级沉淀法[5-6]，但硫酸铵逐级沉淀步骤繁琐，且硫酸铵会引起小部分蛋白的变性。因此，探索一种高效安全的大豆凝集素粗提液制备方法成为大豆凝集素量化提纯的重要前提。Liner利用离子交换和磷酸钙层析制备大豆凝集素[7]。Liener等在不同pH值条件下采用硫酸铵分步沉淀法进行大豆凝集素的分离纯化试验[8]。Wade等也建立离子交换纤维素及羟基磷灰石层析法，并成功得到纯化的大豆凝集素[9-10]。但上述大豆凝集素纯化方法具有纯化效率低的缺点，探索一种高效制备纯化大豆凝集素方法成为研究者关注的热点。因此，笔者根据大豆凝集素能专一性和可逆性地与相应的配基或配体发生特异性结合，对大豆凝集素的纯化方法进行进一步的完善。目前主要采用亲和层析法进行大豆凝集素的制……