高 雄， 刘秀霞， 孙曼曼， 杨艳坤， 白仲虎

(1. 江南大学 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室， 无锡 214122; 2. 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室， 无锡 214122; 3. 江南大学 生物工程学院， 无锡 214122)

谷氨酸棒杆菌是一种兼性厌氧的革兰氏阳性工业微生物，广泛用于一些有机酸的合成[1]。因具有无内毒素、抗逆性强、蛋白酶水平较低等优势，近年来谷氨酸棒杆菌也正逐渐被开发用于生物燃料的生产以及外源重组蛋白的表达[2-3]。

乙醇是各种分子伴侣的强烈诱导剂，分子伴侣表达水平的提高能够促进重组蛋白的可溶性表达[4-5]。尽管也有一些添加乙醇后对大肠杆菌蛋白表达产生有益效果的报道，但这一策略往往会因为大肠杆菌的乙醇耐受性较差而无法实现[6-7]。相比之下，革兰氏阳性菌株的有机溶剂耐受性要高于革兰氏阴性菌株，谷氨酸棒杆菌又拥有较强的乙醇脱氢酶活性，可以利用乙醇作为唯一碳源生长[8]。为了研究添加乙醇的策略是否能够对谷氨酸棒杆菌表达重组蛋白产生促进作用，笔者就乙醇添加对于谷氨酸棒杆菌EGFP的表达以及菌体生长等方面的影响进行了研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株、质粒和引物

谷氨酸棒杆菌CGMCC1.15647(CorynebacteriumglutamicumCGMCC1.15647)、大肠杆菌DH5α、质粒pXMJ19由本实验室保藏。质粒p19-0(pXMJ19-mut△Ptac，△lacI，T7 Isolator)、pXMJ19-EGFP(pXMJ19-mut，△lacI，EGFP)由本实验室构建和保藏[9]。自诱导载体PICL-B-EGFP在本研究中构建。所用引物见表1，引物的合成和测序工作均由苏州金唯智公司完成。

表1 本试验所用的引物Table1 Primers used in this study

1.1.2 培养基和培养条件

大肠杆菌使用LB培养基在37 ℃培养。……