沈小瑞， 王钰， 陈达伟

(安徽大学 资源与环境工程学院， 合肥 230601)

红曲霉(Monascusspp.)在中国的应用有着很久远的历史，在工业、食品、医学等方面都占据着重要作用[1-3]。红曲霉可产多种对人体有益的次生代谢产物，如γ-氨基丁酸、麦角甾醇、洛伐他汀等。其中洛伐他汀是当今世界治疗高血脂症的有效药物之一，具有多种药理作用[4-6]。常见产洛伐他汀真菌有红曲霉，土曲霉与青霉菌，但产量不适宜大规模生产，提高洛伐他汀的产量具有重要意义。酰基转移酶LovD是洛伐他汀的生物合成中一个重要酶， LovD 催化 Monacolin J(洛伐他汀前体物)进行转酰基作用，合成洛伐他汀[7]。所以研究LovD基因对洛伐他汀的生物合成具有重要意义[8]。

根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)是一种革兰氏阴性菌[9]，有将自身部分DNA转移到宿主基因组中的能力，在基因工程和分子生物学基础研究中具有重要作用[10]。De Groot等[11]利用根癌农杆菌转化黑曲霉，为丝状真菌的遗传转化开创了新的研究方法。目前，根癌农杆菌已被成功运用于食药用真菌、动植物致病性真菌等多种真菌的遗传转化。据报道，已有超过125种真菌通过此方法完成遗传转化[12-15]，但对红曲霉的农杆菌遗传转化研究相对较少。

本研究以紫外诱变后得到的高产洛伐他汀菌株M120-1为出发菌株，通过RT-PCR技术克隆LovD基因序列，构建过量表达载体，使用根癌农杆菌介导红曲霉遗传转化，筛选阳性菌株，通过高效液相色谱法筛选高产洛伐他汀菌株，并对其进行遗传稳定性分析，以期为研究红曲霉产洛伐他汀分子机制奠定基础。……