于立江 刘怡茜 黄余峰 崔丽华 杨武 陆网坤

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是全球范围内第五大恶性肿瘤，也是最常见的致死性恶性肿瘤[1-2]。HCC组织中BARD1蛋白的表达和肝癌的病理及预后有着密切的关系[3]。BARD1是能与乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1，BRCAl)结合的环指结构蛋白，其具有指环样结构，可与其他蛋白发生各种联系，目前发现其参与细胞增殖、细胞凋亡、细胞泛素化等过程[4]。本研究观察了影响肝癌组织中BARD1的表达水平及其与病理、预后的关系分析因素，现将结果报道如下。

资料与方法

一、临床资料

2012年1月至2018年12月于医院接受治疗的肝癌患者105例，另选取50例肝脏手术标本中正常肝脏组织，病理结果证实无癌变肝脏组织作为正常肝脏组织的对照组，其中肝癌患者：男59例，女46例；年龄37～76岁，平均(59.13±7.83)岁；体质量39～82 kg，平均(62.28±8.59)kg；对照组男26例，女24例；年龄37～77岁，平均(58.87±7.22)岁；体质量40～84 kg，平均(60.97±7.98)kg；两组患者性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。纳入标准：(1)所有患者均符合2000 年中国抗癌协会肝癌专业委员会修订的《原发性肝癌诊断标准》[5]诊断标准。(2)患者术前均未行化学治疗或放射治疗；(3)患者精神正常。排除标准：(1)合并艾滋感染和伴其他恶性肿瘤；(3)代谢性脑病、中毒性脑病和颅脑疾病患者；(3)精神病患者及其他原因所致昏迷或精神行为异常者。

二、观察指标及方法

(一)随访情况

采用回顾性研究的方法，摘录患者的临床资料和实验室检查信息，以患者住院确诊为肝癌的临床及生化资料为研究资料，对研究对象进行电话随访，直至患者死亡或研究结束，研究截止时间为2018年12月30日。

(二)基本资料调查

通过本院自制的调查问卷对接受研究者的一般资料进行统计，原则上由患者本人亲自填写，若患者不方便填写将由护士或者患者亲属代其填写。

(三)实验室检查

患者确诊肝癌后取其肝脏组织细胞作为研究资料，使用BARD1兔抗人多克隆浓缩型抗体(购自美国 abcam 公司；货号：2059C4a)使用时1∶200 PBS液稀释后按照说明书操作。将肝癌组织切片脱蜡过氧化氢室温孵育 10 min；使用柠檬酸修复10 min，山羊血清封闭室温10 min，加入一抗工作液，放入冰箱 4℃ 过夜后滴加生物素标记二抗工作液，使用PBS冲洗后，滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，室温 10 min；PBS 冲洗，DAB(DAB 显色试剂盒购自福州迈新试剂公司)显色，自来水冲洗，苏木素复染，封片。用染色好的片子为阳性对照，PBS 代替一抗作为阴性对照。高倍镜下随机选 4 个视野以平均灰度值作为染色强度的评价BARD1的表达水平。

三、统计学分析

结 果

一、随访结果

至研究结束，105例肝癌患者共发生死亡事件55例，50例患者存活。本研究死亡率为52.3%，存活率为47.7%。

二、两组肝组织中BARD1的表达水平

肝癌患者BARD1的表达水平(105.21±11.21)显著高于正常组BARD1的表达水平(75.31±7.25)且差异有统计学意义(P<0.05 )。

三、 两组患者病理特征影响预后单因素分析

两组患者男性、年龄≤50岁、吸烟、饮酒、肝硬化几率、血清 AFP≤25 μg/L比较无显著差异(P>0.05)；生存组出现包膜、肿瘤直径>5 cm、TNM 分期Ⅲ-Ⅳ、BARD1过表达出现几率 显著低于死亡组(P<0.05)，见表1。

表1 两组患者病理特征影响预后单因素分析

四、两组肝癌患者多因素Logistic分析

以是否发生肝癌因变量，将单因素筛选有意义项作为自变量并进行赋值，将BARD1过表达(是=1，否=0)、包膜(有=1，无=0)、肿瘤直径≥5 cm(是=1，否=0)、TNM 分期 Ⅲ-Ⅳ(是=1，否=0)、电解质紊乱(有=1，无=0)纳入多因素Logistic回归模型，结果显BARD1过表达、包膜、肿瘤直径≥5 cm、TNM分期 Ⅲ-Ⅳ是肝癌的独立危险因素，见表2。

表2 乙型肝炎肝硬化失代偿期多因素Logistic分析(n,%)

讨 论

Sporn等[6]研究表明，完整野生型BARDl是评估癌症预后的生物标志物，也证实正常野生型BARD l的结肠癌患者预后好。本研究使用单因素分析得出存活组BARD l过表达人数显著低于死亡组。使用Logistic回归分析显示BARD1过表达是肝癌的独立危险因素。Mcmahon等[7]研究得出BARD1过表达是肝癌的独立危险因素，与本研究相一致。

张相国等[8]研究表明：有包膜的肿瘤，后期的预后较好。本研究使用单因素分析得出存活组有包膜患者显著多于无包膜患者，且使用Logistic回归分析显示包膜是肝癌的独立危险因素。有包膜的肿瘤有一定的活动度，表面较光滑，手术切除时，容易治愈，且后期预后较好，恶性肿瘤通常表面无包膜且不光滑，质地坚硬，和周围组织的界线不清楚，后期预后较差。王建民等[9]研究表明：有无包膜是肿瘤预后的独立危险因素，与本研究相一致。

肿瘤的大小往往是决定HCC患者治疗方式的关键因素，肿瘤直径越大治疗难度越大、患者生存期越短[10]。本研究使用多因素回归分析发现肿瘤直径≥5 cm是肝癌的独立危险因素。肿瘤直径越大，分化程度越低，其表达就越高，手术切除的风险较大，患者的生存期越短。周延岩[11]研究表明：肿瘤直径>5.75 cm是肝癌的独立危险因素，与本研究相一致。

TNM分期能够很好地评估肝癌手术切除后的无瘤生存状况[12]。本研究使用单因素分析得出存活组TNM 分期 Ⅲ-Ⅳ患者人数显著少于死亡组，使用Logistic回归分析显示TNM 分期 Ⅲ-Ⅳ是影响肝癌预后的独立危险因素。王瑞涛等[13]研究表明：TNM 分期是影响肝癌预后的独立危险因，与本研究相一致。

综上所述，肝癌脏组织中的BARD1表达显著高于正常肝组织，BARD1过表达、包膜、肿瘤直径≥5 cm、TNM分期是影响肝癌预后的重要因素。