王聿杰

辽宁省军区沈阳第八离职干部休养所门诊部，辽宁沈阳110016

中国传统中药丹参为唇形科植物丹参的根。丹参的中成药制剂在我国已通过国家审批并在临床应用多年，用于心肌缺血和冠状动脉心脏病的治疗。丹参素是丹参的活性成分之一，对心血管疾病具有治疗作用。丹参素能抵抗氧化应激对心肌细胞的损伤，减少心肌缺血时心肌细胞凋亡，具有保护心脏的作用[1-4]。同时，丹参素对于动脉粥样硬化也具有保护作用[5]。胚胎干细胞(embryonic stem cells，ESCs)分离于早期胚胎的内细胞团，具有永生性和多向分化潜能。Klug等[6]通过ESCs形成拟胚体(embryoid bodies，EBs)体外诱导ESCs分化成为心肌细胞。Kehat等[7]建立可重复的ESCs体外自发向心肌分化模型。本研究利用小鼠ESCs体外向心肌分化模型，分别加入丹参及丹参素，探讨其促心肌细胞分化的作用，进而阐述丹参素在缺血性心肌病中发挥心脏保护作用的机制，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 小鼠ESCs购自ATCC。主要试剂包括DMEM培养基、胎牛血清、IMDM培养基(GIBCO)，LIF(CHEMICOH)，丹参注射液(国药集团宜宾制药)，丹参素(MACKLIN，R832661-100 mg)，western及IP细胞裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒(Beyotime)，α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain，α-MHC)、八聚体结合转录因子 4(octamer-binding transcription factor 4，OCT4)及GAPDH(ABCAM)，辣根过氧化物酶羊抗兔二抗(Transgene)。

1.2 研究方法

1.2.1 ESCs培养与扩增 含10%胎牛血清的DMEM培养基，加入 LIF，终浓度100 U/ml，保持ESCs的未分化状态，于37℃、5%CO2条件下培养小鼠ESCs，隔日换液，待细胞集落80% ～90%融合时传代。

1.2.2 EBs制备 以含20%胎牛血清的IMDM为分化培养基，将ESCs制成浓度为5×104个/ml的细胞悬液，以每滴20 μl种于直径10 cm的培养皿盖上，培养皿内中放入10 ml PBS，盖上皿盖，置于37℃、5%CO2的培养箱中。……