张 轩，王 淏，罗燕芬，李有强△

(1.广东省中医院/广州中医药大学第二附属医院检验科，广东广州 510120； 2.广州血液中心检验科，广东广州 510095)

铜绿假单胞菌是医院常见的条件致病菌，常感染癌症、严重皮肤烧伤、囊性肺纤维化及各种免疫力低下患者[1]。3-O-C12-HSL是铜绿假单胞菌重要的毒力分子之一，可调节铜绿假单胞菌的耐药和宿主的免疫功能，介导免疫逃逸[2-3]。长链非编码RNA(LncRNA)是长度大于200个核苷酸的非编码RNA，可调控基因的表达，涉及的调控层面包括转录调控，翻译水平调控和表观遗传调控，调控方式包括染色体修饰、转录激活或干扰等[4]。有研究表明[5]，从单核细胞分化为单核细胞源性树突状细胞(Mo-DCs)过程中，LncRNA表达谱出现了明显差异，LncRNA Lnc-DC被发现可与转录因子STAT3结合，阻碍SHP1介导的去磷酸化作用，从而调控Mo-DCs的分化。前期研究发现3-O-C12-HSL 在阻碍Mo-DCs 成熟过程中LncRNA的表达谱也出现了明显差异。本文以长链非编码RNA RP11-367F23.2为切入点，研究3-O-C12-HSL是否抑制Mo-DCs表达RP11-367F23.2，该抑制作用是否经过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)介导。

1 材料与方法

1.1 材料 RPMI 1640和胎牛血清(Life公司)；脂多糖(LPS)、3-O-C12-HSL和GW9662(Sigma公司)；人淋巴细胞分离液Ficoll(Axis-shield公司)；磷酸缓冲盐溶液(PBS)、二甲基亚砜(DMSO)和Trizol(invitrogen公司)；FITC-CD14(eBioscience公司)；抗人CD14磁珠(BD公司)；人白细胞介素-4(hIL-4)和人粒单核细胞集落刺激因子(hGM-CSF)和PPARγ(Peprotech公司)；PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser和SYBR®Premix Ex TaqTMⅡ(TAKARA公司)； ABI Viia7高产率荧光定量聚合酶联反应(PCR)仪(美国ABI公司)。

1.2 方法

1.2.1 Mo-DCs分离和培养 选取健康人外周血50 mL，加入等量的PBS混匀后，加入到100 mL人淋巴细胞分离液上面，密度梯度离心法获得单个核细胞。PBS洗涤后用CD14磁珠分选CD14+单核细胞，加入完全培养基(含10%胎牛血清RPMI 1640培养基、终浓度500 U/mL的hIL-4和500 U/mL的hGM-CSF)，细胞密度为1×106/mL。……