曾志能

(桂林医学院附属医院检验科， 广西桂林 541001)

狼疮性肾炎(LN)不但是系统性红斑狼疮(SLE)常见的并发症之一，而且是继发性肾病导致终末期肾衰竭的一种疾病[1]。多见于中、青年女性，其发病与免疫复合物形成、免疫细胞和细胞因子等免疫异常有关。据数据显示5年肾脏存活率为46%～95%，其75%患者可有肾脏受累的临床征象[3]。因此，为寻找新的LN生物学指标，研究者已经做了大量研究，然而到目前为止，还未找到一种公认的LN的特异性生物学标志物[2]。目前，随着对炎症趋化因子和细胞因子的研究更加深入，从中发现新的细胞因子可以作为LN的生物标志物，LN患者和狼疮鼠模型肾脏病理均存在血清和尿中白细胞介素-18(IL-18)，在抗微生物、抗自身免疫疾病等方面将会得到充分应用，并且在LN的发病机制中起主要作用。而跨膜蛋白-肾损伤分子-1(KIM-1)表达于受损的近曲小管上皮细胞，也可作为检查LN早期肾损伤定量的生物学标记物[4]。有关资料表明，LN患者血清和尿液中IL-18和KIM-1表达水平显著升高，血清和尿液中IL-18和KIM-1表达水平和LN严重性及治疗效果密切相关，同时对LN的复发具有预测价值[5-6]。目前血清和尿液IL-18和KIM-1表达水平在LN患者的临床研究报道较少。为此，本研究旨在探讨LN患者血清和尿液IL-18和KIM-1表达水平与反映肾脏病变常规实验室检查指标间的关系及其对活动性LN的临床诊断意义，为LN临床治疗预后提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2016年10月至2017年9月就诊的LN患者60例(LN组)及60例体检健康者(对照组)作为研究对象。纳入标准：(1)所有纳入患者均符合1997年美国风湿病学会修订的LN及SLE分类诊断标准[7]；(2)临床资料详细且真实；(3)经肾活检确诊为LN；(4)既往无高血压、糖尿病者。排除标准：(1)近期行免疫抑制剂治疗者；(2)合并肝肾等重要脏器损伤者；(3)类风湿关节炎及自身免疫性疾病者；(4)继发性肾脏疾病者。LN组根据系统性红斑狼疮疾病活动指数2000(SLEDAI-2000)评分系统分为LN活动组(SLEDAI评分≥10分)35例和非活动组(SLEDAI评分<10分)25例；再按照ds-DNA抗体是否阳性分为抗ds-DNA抗体阳性组35例，抗ds-DNA抗体阴性组25例。LN活动组男15例，女20例，年龄19～60岁，体质量35～75 kg；非活动组男9例，女16例，年龄25～55例，体质量40～65 kg。两组患者C反应蛋白、尿蛋白定量等指标比较差异有统计学意义(P<0.05)，其他基本情况比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两组患者临床资料比较

1.2 检测方法 首先收集患者的基本情况及生化指标等。血清IL-18和KIM-1水平测定：抽取受试者第1天早上8:00时空腹静脉血5 mL，低温状态下在4 000 r/min的离心机中离心5 min，留取上清液分装贮藏在-80 ℃低温冰箱中保存待检。尿液IL-18和KIM-1水平测定：同时，用无菌试管收集受试者早晨尿10 mL，4 000 r/min并离心5 min收集血清和尿液上清液，放置于56 ℃水浴锅30 min灭活，然后用0.22 μm微孔滤膜滤过除菌，最后放入在-20 ℃冰箱中保存备用。采用酶联免疫吸附法检测血液及尿液中IL-18和KIM-1水平。具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行，其来源于北京奇松生物科技有限公司。

2 结 果

2.1 比较3组血清和尿液IL-18和KIM-1水平的变化 3组血清和尿液IL-18和KIM-1水平比较差异均有统计学意义(P<0.05)，其中LN活动组血清和尿液IL-18和KIM-1水平明显高于非活动组与对照组，非活动组血清和尿液IL-18和KIM-1水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.2 LN患者血清及尿液IL-18和KIM-1水平与ds-DNA抗体之间的关系 LN患者血清和尿液中IL-18和KIM-1水平在抗ds-DNA抗体阳性组与抗体阴性组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表2 3组血清和尿液IL-18和KIM-1水平比较

注：*P<0.05,与对照组比较；#P<0.05,与非活动组比较

表3 各组血清和尿液IL-18和KIM-1水平比较

2.3 LN患者血清及尿液中IL-18和KIM-1水平与临床指标的相关性分析 根据相关性结果显示：LN患者血清中的IL-18和KIM-1水平与白细胞计数、C反应蛋白、尿蛋白定量之间均呈负相关(P<0.05)，且补体C3、补体C4、红细胞沉降率及SLEDAI评分之间均呈正相关；LN患者尿液中的IL-18和KIM-1水平与白细胞计数、补体C3、补体C4之间呈负相关，与C反应蛋白、尿蛋白定量、红细胞沉降率及SLEDAI评分之间均呈正相关(P<0.05)。见表4。

表4 LN患者血清及尿液中IL-18和KIM-1水平

注：*P<0.05

3 讨 论

SLE患者中约有1/3～1/2存在肾脏受累的临床表现，LN是最常见的继发性肾病之一，也是SLE患者主要死亡原因之一。近年来，肾脏活检是诊断LN严重程度及其肾脏功能损害的金标准并是LN治疗的重要参考指标[8-10]。但有创性及风险性限制了其临床应用[11]。因此探索判断LN严重程度重要性和活动性的实验室检查指标显得尤为重要，寻找一种操作方面及简单的指标来评估LN患者肾病变的活动性，这是许多医务人员及研究者们的共同目标。

IL-18是1989年有研究者发现从痤疮丙酸杆菌和LPS致内毒素休克的小鼠血清中分离出一种类似IL-12的因子，相对分子质量约为75×103。其作用是由巨噬细胞样细胞产生，具有诱导Th1细胞产生IFN-γ；促进T细胞增殖；加强FasL介导的细胞效应；与IL-12共同作用诱导B细胞产生IFN-γ等多种生物学功能。这预示着IL-18是一种具有广泛应用的细胞因子，血清和尿中IL-18的表达水平和LN病理密切相关。KIM-1是免疫球蛋白基因超家族的一员，其生物学作用尚不明确，可能参与免疫反应和肾脏疾病的损伤及修复过程及释放细胞外对抗损伤性黏附[12]。既往研究发现原位杂交和免疫组化显示，KIM-1表达于再生近曲小管含有细胞增殖的标记物的上皮细胞和含有细胞去分化的标记物的上皮细胞，提示KIM-1的表达与上皮细胞的去分化和增殖有关，并借此参与小管上皮组织形态和功能完整性的恢复[13-14]。因此，血清和尿KIM-1可判断预后及药物肾毒性的鉴定中发挥重要作用。研究证明，血清和尿中IL-18和KIM-1能够更早反映肾损伤[15]。

本研究通过ELISA方法对LN患者血清及尿液中的IL-18和KIM-1水平进行了检测，结果表明：3组血清和尿液IL-18和KIM-1水平比较差异均有统计学意义(P<0.05)，其中LN活动组血清和尿液IL-18和KIM-1水平明显高于非活动组与对照组，且非活动组血清和尿液IL-18和KIM-1水平明显高于对照组，由此可见，血清和尿液中IL-18和KIM-1表达水平高低和LN的病情活动度、狼疮病情复发有关，甚至和LN的病理类型密切相关[16]。同时LN患者血清和尿液中的IL-18水平与补体C3、补体C4、红细胞沉降率及SLEDAI评分之间均呈正相关，此结果和近几年活动性LN血清和尿液中IL-18和KIM-1升高报道一致[17-18]。临床上判断病情活动性的指标，如补体C3、C4、红细胞沉降率、dcDNA滴度可反映整体狼疮病情控制的情况，补体C3在肝损害时，也不能很好地反映狼疮病情的活动性；红细胞沉降率还受感染等多种因素影响。因此，深入研究LN的生物学作用及其在肾脏中的表达水平及临床意义，对完善LN的发病机制和提供新的治疗思路可能具有重要意义。根据相关性结果显示，LN患者血清及尿液中的KIM-1水平与C反应蛋白、尿蛋白定量、红细胞沉降率及SLEDAI评分之间均呈正相关，这一结果提示，尿液KIM-1水平可可能与LN密切相关，而且有可能成为LN疾病活动的预测因子，从而更好地反映LN患者病情变化。

综上所述，血液和尿液中的IL-18和KIM-1表达水平可能作为LN疾病的生物标记物，且二项指标检测对病情的预后及治疗具有积极的指导意义。