关 明,郭 玮,刘维薇,娄加陶,田月如,郭 永

(1.复旦大学附属华山医院检验科，上海 200040；2.复旦大学附属中山医院检验科，上海 200040； 3.上海市第十人民医院检验科，上海 200072;4.上海市胸科医院检验科，上海 200030; 5.清华大学生物医学工程系,北京 100084)

关 明

关明：随着分子遗传知识的积累，DNA和RNA分子的定量变得越来越重要。人们发明了诸多方法，以便尽可能精确地量化核酸的数量。在序列特异性定量方法中，基于聚合酶链反应(PCR)的技术一直是较为理想的选择。实时定量PCR被认为是生物医学实验室的常规操作，但由于其计量的灵敏度有限，无法满足越来越严格的定量要求，尤其是当目标浓度较低或存在PCR抑制剂干扰精细测定时。此外，随着下一代测序和单细胞分析等技术的不断发展，人们对核酸定量的兴趣已经达到了前所未有的单分子水平，这导致了数字PCR技术的繁荣。“限制稀释PCR”和“单分子PCR”是最初用来描述这种方法的名称，直到更流行、更贴切的术语“数字PCR”被提出，很快引起了生物医学研究者的广泛关注。数字PCR 的策略很简单，就是“分而治之”，这是一个很好的比喻。DNA样品分别在独立但相同的分区中进行扩增，每个反应的全或无检测结果均遵循泊松分布。在计算阳性反应的总和后，通过泊松校正，不仅可以得到目标分子的浓度，还可以得到目标分子的绝对数量。因其高灵敏度和特异性，数字PCR目前正应用于绝对等位基因定量分析、病毒核酸检测、罕见突变检测、拷贝数变异分析、DNA甲基化分析、基因重排分析。……