张阳东，周建荣，楚瑞雪，周国勇，朱 磊

(1．火箭军总医院特勤医学科，北京 100088；2．解放军第532医院，安徽黄山 245000；3．火箭军总医院礼士路门诊部，北京 100820)

血小板内皮细胞黏附分子-1(platelet endothelia1 cel1 adhesion molecule-1，PECAM-1)表达于血管内皮并参与动脉粥样硬化斑块的形成，是糖尿病患者微血管病变发生的促发因素之一。为了研究PECAM-1基因与冠心病(coronary artery disease，CAD)及2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)的相关性，我们对PECAM-1基因的rs7503550位点多态性和表达水平进行了检测分析。

1材料和方法

1.1 研究对象 2014年11月～2016年5月就诊于火箭军总医院的CAD患者组122例，年龄35～75岁，平均年龄63.0±8.4岁，其中男性77例，女性45例；T2DM组99例，年龄25～77岁，平均年龄57.9±12.2岁，其中男性60例，女性39例；对照组126例，年龄48～78岁，平均年龄62.0±5.8岁，其中男性74例，女性52例。三组研究对象的纳入标准参照文献[1-2]。

1.2 仪器和试剂 本研究所应用仪器和试剂来源参见文献[1]。引物设计：PECAM-1(基因序列号为：Nm_000442)的RT引物：5’-GTACGACTCACTATAGGGACGCAATGATCAAGAGAGC AA-3’，浓度为500 nmol/L；PCR引物：5’-AGGTGACACTATAGAATATCAAATGACCTCAAA TGCCA-3’。rs7503550的PCR引物：5’-AAGGCTGAGGACCTGGCC-3’和5’-ATTATGTGATCTGTAGTTTGGAAGC-3’。延伸引物：5’-CTAACTAAGCTACGCCGACATTCCTCCCGA TCCCCTCCAAACCCA-3’。

1.3 方法和统计学 白细胞DNA和RNA的提取、核苷酸的多态性分型、基因表达水平的检测及统计学分析等参见笔者先前发表的文献[1-3]。

2结果

2.1 基因型频率分析 见表1。rs7503550位点的基因型和等位基因在本研究三组人群中的分布频率符合Hardy-Weinberg平衡，说明纳入本研究的样本具有群体代表性。统计结果显示CAD组和T2DM组rs7503550的基因型和等位基因频率与对照组相比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 rs7503550基因型和等位基因频率分布[n(%)]

注：*为CAD组和对照组比较；#为T2DM组和对照组比较。

2.2 基因表达水平分析 以参考基因SRP14和β-actin的几何均值为标准化因子，对照组的基因表达水平为0.548±0.379，CAD组为0.726±0.514，T2DM组为0.731±0.559。C……