李芹 张蕾 王亚坤 田利远

(河北医科大学附属河北省儿童医院呼吸科，河北 石家庄 050031)

肺炎支原体肺炎(mycoplasmal pneumouniae pneumounia，MPP)是小儿常见的大叶性肺炎，可并发多系统、多器官功能损害。既往研究，其发病机制复杂，但近年来免疫机制成为目前医学界广泛关注的热门课题。国内、国外学者均提出可能由于CD4+T辅助细胞或CD8+T抑制细胞之间的紊乱引起了机体的免疫抑制[1-2]。本实验就CD4+T辅助细胞及其细胞因子进一步探讨MPP的免疫机制，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年4月至2017年10月在我院呼吸科住院期间确诊为MPP患儿30例为实验组，其中男17例，女13例，平均年龄(5.6±2.9)岁；细菌性肺炎患儿30例为普通组，男16例，女14例，平均年龄(6.1±3.5)岁；肺炎支原体肺炎诊断标准参照第8版《诸福棠实用儿科学》。选取同期我院健康体检儿童30名为对照组。实验组、普通组与对照组患儿年龄及性别差异无统计学意义(P均>0．05)。

1.2 方法 所有患儿在治疗前及治疗后(加用甲泼尼龙静滴5 d)取静脉血2 mL；于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管，标本静置20 min后，以3 000 r/min离心5 min，取上清液均置-80 ℃冰箱保存待检；采用梯度离心分离单个核细胞，采用贝克曼流式细胞仪及配套试剂盒检测T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)；通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清INF-γ/IL-4、INF-γ、IL-4、IgE含量。ELISA试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司。

2 结 果

2.1 T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)水平 与治疗前比较，实验组治疗后血清CD4+/CD8+、CD4+水平均升高，CD8+水平下降，统计学比较，差异显著(P<0.05)；治疗前，实验组CD4+/CD8+、CD4+水平均低于对照组及普通组，CD8+水平高于对照组及普通组，统计学比较差异显著(P<0.05)。见表1。

表1 各组患儿血清CD4+/CD8+、CD4+和CD8+水平比较

注：与治疗前比较：*P<0.05；与对照组、普通组比较：△P<0.05；

2.2 血清INF-γ/IL-4、INF-γ、IL-4和IgE含量 治疗前，实验组、普通组患儿血清INF-γ 、IL-4水平明显增高，分别与对照组比较，差异显著(P<0.05)，INF-γ/IL-4水平下降，与对照组比较差异显著(P<0.05)；治疗前，实验组INF-γ 、IL-4水平较普通组升高，INF-γ/IL-4水平下降，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后实验组血清INF-γ 、IL-4水平较治疗前均下降，INF-γ/IL-4水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。治疗前，实验组血清IgE(380.5±40.6 u/mL)水平明显升高，与对照组(75.8±18.3 u/mL)、普通组(76.5±19.8 u/mL)比较，统计学差异显著(P<0.05)，治疗后降至正常水平，与对照组及普通组无差异(P>0.05)。

表2 各组患儿血清INF-γ/IL-4、INF-γ和IL-4水平比较

注：治疗前，与对照组比较：aP<0.05，与普通组比较：bP<0.05；实验组治疗后与治疗前比较cP<0.05。

3 讨 论

目前儿童肺炎支原体肺炎最热议的发病机制是免疫机制，主要包括免疫抑制和自身免疫这两种学说。在MPP患儿的免疫反应中，肺炎支原体侵入宿主后可诱导T、B淋巴细胞增殖，破坏二者亚群的比例，造成淋巴细胞的多克隆活化，引起Th2型细胞免疫占主要优势，而Th1型细胞免疫则会受抑制，机体无法发挥正常的免疫功能，进一步引起机体免疫抑制[2]。临床工作中发现，对于存在严重合并症的MPP患儿，应用糖皮质激素对控制病情、缩短疗程、改善预后有重要作用，说明通过调节免疫可取得良好疗效[3]。

T细胞作为机体细胞免疫的主要参与者，在机体感染后可成熟分化为不同亚群，继而分泌细胞因子来影响疾病发生、发展和预后[4]。根据表面标志可将成熟T淋巴细胞分为CD4+T细胞和CD8+T细胞2个主要亚群，分别行使不同的功能。CD4+T细胞主要为调节T细胞，包括Th1、Th2等，能促进其他免疫细胞包括B细胞、T细胞等增殖分化，活化后的T细胞还可分泌多种细胞因子参与调节免疫反应。CD8+T细胞主要为杀伤性T细胞，可直接通过识别细胞表面MHC-I类分子直接杀伤靶细胞，发挥其免疫效应。研究显示，难治性肺炎支原体肺炎患儿普遍存在机体免疫功能的紊乱，表现为细胞免疫功能下降，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平明显降低，CD8+水平升高[5]。国外研究也表明，MPP患儿外周血中CD4+T和CD8+T比例失衡，机体细胞免疫功能失调，可能与肺炎支原体感染相关[6]。本实验得到相同的结果，治疗前实验组CD4+/CD8+、CD4+水平明显下降，CD8+水平上升，给予甲泼尼龙治疗后血清CD4+/CD8+、CD4+水平升高，CD8+水平下降至正常，进一步提示肺炎支原体感染后存在CD4+/CD8+比值失衡，而糖皮质激素可能发挥了免疫抑制作用。据报道指出，糖皮质激素可以通过细胞膜，与细胞质内的糖皮质激素受体结合，形成激素-激素受体复合体，进入细胞核内，通过抑制趋化因子、细胞因子、细胞黏附因子及其这些因子受体表达等多种途径，进一步调节T淋巴细胞功能而起到治疗作用[7]。

CD4+T细胞根据其产生的细胞因子和生物学效应分为两种，即Th1型与Th2 型。研究发现，MPP患儿存在Th1/Th2比例失衡，其中以Th2细胞占优势的免疫失衡在MPP致病过程中起主要作用，而Th1细胞则是在抵抗MP感染和抑制炎症反应中发挥作用[8-10]。Th1细胞分泌INF-γ、IL-2、IL-12、TNF-β等促炎因子，介导细胞免疫应答，增强杀伤炎症细胞的细胞毒性作用。Th2细胞产生IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等细胞因子，促进抗体的产生，介导体液免疫应答。目前，一般用INF-γ活性反映Th1细胞功能，IL-4活性则代表Th2功能，通过测定细胞因子变化，间接反映机体的免疫状态。国外研究发现，在MP肺炎患者的肺泡灌洗液中IL-4明显上升，而INF-γ/IL-4明显下降，提示MP感染后主要为Th2 样细胞因子反应[11]。本实验结果显示：治疗前，实验组患儿血清INF-γ 、IL-4水平较普通组升高，INF-γ/IL-4水平下降，而治疗后IL-4水平明显下降，INF-γ/IL-4水平升至正常水平；提示肺炎支原体感染后，存在以Th2细胞占主导优势的免疫失衡，而应用糖皮质激素治疗后，IL-4水平迅速降至正常，恢复Th1/Th2平衡状态；与上述国外报道一致。

另外，Th2细胞分泌的IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等细胞因子，能够增强B细胞介导的体液免疫应答，从而产生大量的IgE，并刺激嗜酸细胞、肥大细胞等产生一系列炎性介质，激发变态反应。本实验结果显示，肺炎支原体肺炎患儿血清总IgE水平异常升高，应用糖皮质激素抑制免疫反应后迅速降至正常，从而再次证明了肺炎支原体感染后存在T淋巴细胞免疫失衡。国内研究指出，肺炎支原体诱导细胞介导的免疫反应越强及细胞因子产生的越多，导致的临床症状及肺损害也就越重[12-13]。

综上所述，肺炎支原体肺炎发病机制与CD4+T辅助细胞水平下降以及Th2细胞占主导优势的免疫失衡有显著相关性，但细胞因子INF-γ、IL-4是如何调控的，需要我们进一步从基因水平探讨、研究，从而更好地指导临床诊治，阻止疾病进展，避免发生严重并发症及遗留后遗症。