杨 潮，何小杨，莫淑芳，戴 京，张欣宇，陈 慧



人基因启动子表达载体的构建及鉴定

杨 潮，何小杨，莫淑芳，戴 京，张欣宇，*陈 慧

(赣南师范大学生命科学学院，江西，赣州 341000 )

人是一种重要的支架蛋白，在端粒酶组装、卡哈尔体（Cahar body）形成和DNA损伤修复等过程中发挥着重要作用。采用PCR扩增技术获得人WDR79基因启动子上游DNA序列，构建人基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3--promoter；通过双酶切、琼脂糖凝胶电泳、DNA测序和荧光素酶活性测定等实验手段，验证质粒pGL3--promoter构建的正确性及其表达活性。本研究结果为进一步探讨人基因表达的调控机制奠定实验基础。

；启动子克隆；荧光素酶活性检测

（WD repeat-containing protein 79）蛋白，又被称为WRAP53或TCAB1，隶属于WD重复蛋白家族，编码该蛋白的基因定位于人染色体17p13.1，与人抑癌基因以“头对头”的方式重叠。基因由13个外显子组成，其中包含了3个可选的起始外显子1-α，1-β和1-γ，编码的蛋白产物由548个氨基酸构成，分子量约为59 kD[1]。作为卡哈尔体重要组成成分的蛋白在细胞核和细胞质中均有表达，可为蛋白质和RNA复合物的装配提供平台，在蛋白质运输、RNA加工及转录以及DNA损伤修复等生理过程中发挥着重要功能[2-3]。近年来，有研究发现在头颈癌、直肠癌、乳腺癌和肺癌等多种癌症中高表达，且其表达水平与癌症病人的预后相关[4-5]，然而迄今对的表达调控机制尚未明确。为此，本研究通过克隆人基因启动子，构建人启动子荧光素酶表达载体，并对其活性进行验证，为进一步探讨人基因表达的调控机制奠定实验基础。……