刘振宁，袁黎，Venkatesan Sundaresan，余小林



拟南芥基因上游转录调控因子筛选及鉴定

刘振宁1,2,3，袁黎2,4，Venkatesan Sundaresan2，余小林3

1. 临沂大学农林科学学院，临沂 276000 2. 加州大学戴维斯分校植物科学系，加利福尼亚州戴维斯 95616，美国 3. 浙江大学农业与生物技术学院，杭州 310058 4. 西北农林科技大学园艺学院，杨凌 712100

拟南芥CKI1 (cytokinin independent 1)是双组分信号系统中一个组氨酸激酶蛋白，通过作用于下游组氨酸磷酸转移蛋白激活双组分信号通路，在调控胚囊中央细胞命运分化和发育过程中具有重要作用。然而目前对于基因上游转录调控因子还知之甚少。本研究分析了不同长度的启动子在拟南芥胚囊中的活性，并利用酵母单杂交技术对上游转录调控因子进行了筛选和鉴定。结果表明，位于内含子区域中的片段表现出与启动子全长相一致的表达活性。进一步选取3个串联重复的片段用于构建诱饵表达载体，同时，选取拟南芥雌蕊构建cDNA文库，通过酵母单杂交筛选获得226个阳性克隆。去除低质量及冗余重复的序列后共获得66条可读序列，其中8条序列对应的基因编码具有DNA结合功能的蛋白。研究结果为进一步揭示基因的转录调控机制提供了重要参考信息。

；转录调控；酵母单杂交；拟南芥

双组分信号系统(two-component system, TCS)最初是在研究大肠杆菌()氮调节蛋白系统时发现的[1]。最简单的双组分信号系统包括用于感应输入信号的组氨酸激酶(histidine kinase, HK)和用于调节输出信号的反应调节因子(response regulator, RR)两种元件，原核生物常以简单的双组分信号系统形式存在。……