贺生芳，郭澍强，谈静惠，马晓花，杨旭光，郝俊虎

（银川海关综合技术中心，宁夏银川 750001）

志贺氏菌（Shigella）俗称痢疾杆菌，可引发急性痢疾[1]。近年来，因为食入被志贺细菌污染的食品而导致的食品安全问题逐渐引起大家关注。因此，建立志贺氏菌快速、准确、灵敏、特异的检测方法，及时发现潜在的食品质量问题，阻止不合格食品流入市场，成为保证食品安全有效的关键因素。

目前，我国志贺氏菌属检测方法主要采用国标法。其中：细菌分离培养法，操作繁琐，检测周期长、灵敏度低；分子生物学检测方法（包括普通PCR和荧光定量PCR方法等）均存在检测灵敏度低以及气溶胶污染等问题[2-4]。环介导等温扩增技术（loop-mediatedisothermal amplification，LAMP）是日本荣研化学株式会社学者建立的一种新型核酸扩增方法，通过针对靶基因的 6个区域设计 4条或者6条特异引物，利用链置换DNA 聚合酶，在恒温条件下作用 40～60 min，即可完成核酸扩增反应[5-6]。本试验通过将LAMP技术分别与荧光检测技术和浊度检测技术相结合，使整个恒温扩增过程能够实现实时监测，并且将结果以浊度、荧光曲线直观反应[7-9]，从而为实验室和现场检测提供一种快速且易于操作的检测方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 试验中所用菌株见表1。

1.1.2 试剂 细菌基因组DNA快速抽提试剂盒（产品批号B518225）：上海生工；2×反应缓冲液RM；Bst DNA聚合酶（产品批号5Z006）：荣研生物科技（中国）有限公司；2×Taq PCR Master Mix（产品批号 P4218）、DL 1000 DNA Maker（产品编号3591A）：天根生化科技（北京）有限公司；Isothernal MasterMix购自英国OptiGene公司；各细菌培养基购自北京路桥。

表 1 试验中所用到的菌株