王宙，沈静，刘洋，王天娇，曲云鹏，秦智峰，季朝红，张静

肾动脉粥样硬化性狭窄（ARAS）是引起继发性高血压最常见的病因之一。动脉粥样硬化的发病机制非常复杂，各种理化因素所致的内皮损伤被认为是其发生发展的始动因素[1]，其中尤以血脂异常最为常见，也最易可控。有研究发现，高脂血症与炎症反应在动脉粥样硬化及动脉粥样硬化性肾动脉狭窄的发生发展中起重要作用[2]。目前，对于ARAS性高血压的治疗主要有三种方式：药物治疗、介入治疗、外科手术治疗[3,4]。据报道，抑制炎症反应可控制动脉粥样硬化的发生发展[4,5]。药物治疗通过使用他汀类药物降低血脂，抑制动脉粥样硬化相关炎症反应，从而达到稳定或者逆转粥样硬化斑块的作用。有研究证实，小剂量瑞舒伐他汀联合血脂康可有效调节动脉粥样硬化相关因子，使血NO（一氧化氮）升高，ET-1（内皮素-1）、髓过氧化物酶（MPO）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）显著降低[6]，本实验旨在此基础上，进一步探究中西药联合降脂对肾动脉粥样硬化性高血压大鼠炎症反应的影响。

1 方法

1.1 实验动物及试剂6周龄雄性wistar大鼠60只，体重（210±10）g，由吉林大学实验动物中心提供。瑞舒伐他汀由阿斯利康药业（中国）有限公司生产；血脂康（北京北大维信生物科技有限公司）；高脂饲料的配制：3%胆固醇+0.5%胆酸钠+0.2%丙硫氧嘧啶+10%猪油+5%白糖+基础饲料；大鼠MMP-9抗体（万类生物科技有限公司）；大鼠MPO抗体（北京博奥森生物技术有限公司）。

1.2 建立ARAS高血压模型大鼠方法手术组大鼠（55只）采用两肾一夹（2K1C）、平行针灸针缩窄法造模，并予腹腔注射VitD3 50万IU/kg 3 d及高脂喂养8周；假手术组（5只），只分离肾动脉，未予狭窄，余操作同手术组。造模成功标准：喂养8周后随机抽取T组大鼠5只及假手术组大鼠5只，使用powerlab测量大鼠血压，手术组较假手术组大鼠平均血压高20 mmHg以上/高于115mmHg。模型大鼠排除标准：因狭窄过度导致肾脏萎缩、坏死。

1.3 实验大鼠分组将造模成功的大鼠随机分为5组，并按以下方案药物灌胃：T1组：血脂康120 mg/kg/d；T2组：瑞舒伐他汀1 mg/kg/d；T3组：瑞舒伐他汀1 mg/kg/d+血脂康120 mg/kg/d；T4组：瑞舒伐他汀0.5 mg/kg/d+血脂康120 mg/kg/d；T0组：等体积的生理盐水。药物灌胃6周。

1.4 相应指标检测药物治疗6周后腹主静脉取血，而后处死大鼠，迅速分离主动脉、肾脏，4%甲醛固定，石蜡包埋。血总胆固醇（TC）、三酰甘油（T G）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平由全自动生化分析仪检测。

1.5 大鼠主动脉及肾脏中MPO、MMP-9的表达将各组大鼠主动脉、肾脏标本切片后，SABC法进行免疫组织化学染色，而后经计算机影像处理和Image-Pro plus 6.0分析系统进行光密度分析，高倍镜（a400）下选取切片，以各切片平均光密度值代表其阳性程度。

1.6 统计学处理所有数据以均数±标准差（±s）表示，并运用SPSS 21.0统计软件进行分析处理。方差齐则采用方差分析，方差不齐则采用Mann-Whitney U检验，P＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 模型大鼠药物干预后血脂的变化情况给予相应的药物干预后，各用药组均可见TC、TG、LDL-C不同程度降低、HDL-C升高，且差异有统计学意义（P＜0.05）。其中T3、T4组血脂改善最明显，但T4组较T3组组间比较未见明显差异（P＞0.05）（表1）。

2.2 模型大鼠药物干预后MPO、MMP在肾脏免疫组化中表达情况药物干预后，各组MPO在肾脏组织中表达均可见不同程度的降低，且差异有统计学意义（P＜0.05），且联合用药组T3、T4下降最为明显，T3组略优于T4组，但差异不明显（P＞0.05）。与T0组相比，T3、T4组MMP-9在肾脏组织中表达明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），但两组组间差异不明显（P＞0.05）（表2，图1～2）。

表1 各组大鼠药物干预后TC、TG、HDL-C、LDL-C结果

表2 MPO、MMP-9在肾脏免疫组化中平均光密度值

2.3 模型大鼠药物干预后MPO、MMP在主动脉免疫组化中表达情况各用药物MPO在主动脉中表达均可见不同程度的降低，T2、T3、T4组差异有统计学意义（P＜0.05），T3、T4组下降最明显，且无明显差异。与T0组相比，T3、T4组MMP-9在主动脉中表达下降明显（P＜0.05），T3下降最明显，但两组无明显差异（P＞0.05）（表3，图3～4）。

图1 MPO在肾脏免疫组化中的表达（×400）

图2 MMP-9在肾脏免疫组化中的表达（×400）

3 讨论

ARAS引起高血压的机制非常复杂，主要与动脉粥样硬化相关，单纯使用降压药物治疗高血压疗效较差，因此需要我们对其发病机制进行深入了解，进而制定更加合理的治疗方案。他汀类药物因其具有降低血脂、改善内皮功能、减缓甚至逆转动脉粥样斑块进展及抗炎作用等多效性[5]，为我们寻求新的治疗方案提供了新思路，然而何种他汀治疗方案最为有效且使用量最小是本研究的重点。

他汀类药物除具有降脂作用外，还主要通过抗炎作用发挥其多效性[7]。由于炎症反应与氧化应激共同参与动脉粥样硬化的形成[8]，因此，在这一过程中发挥关键作用的MPO成为了研究的热点。已经证实，MPO具有促进动脉粥样硬化斑块形成的作用，并能通过多种机制影响粥样斑块的稳定性[9,10]。此外，MPO可激活MMPS（金属基质蛋白酶）酶原，使MMPS表达活性增强，MMPS可降解细胞外基质蛋白，其降解产物又产生趋化炎性细胞聚集的功能，加速AS的发展[6,11]。LDL-C是斑块中的主要成分，可被氧化为OX-LDL,血管平滑肌细胞及巨噬细胞吞噬LDL变为泡沫细胞，进而产生大量活性物质，使AS的进展大大加快。他汀类药物主要就依靠其降LDL-C而发挥其抗AS作用。MMP-9是一种影响粥样斑块稳定性的主要锌离子依赖性蛋白水解酶，主要由斑块中单核-巨噬细胞及血管平滑肌细胞分泌，可降解细胞外基质、 基底膜胶原，软化斑块表面纤维帽， 降低斑块稳定性[12]。据报道，他汀类药物能降低MMP-9表达水平，阻止MMPS酶原激活为MMPS，从而稳定动脉粥样硬化斑块[6]。另外，有报道称，瑞舒伐他汀在发挥降脂、抗炎、抗氧化、稳定AS斑块、逆转AS发生发展等作用的同时，长期大剂量的使用将会导致肝损害、横纹肌溶解等不良反应的发生[13]。因此，寻找一种有效且安全的他汀治疗方案，成为了研究重点。

表3 MPO、MMP-9在主动脉免疫组化中平均光密度值

血脂康是一种从特制红曲中提取的含有天然他汀类元素的中成药。其化学组分复杂，包含有多种必须氨基酸、不饱和脂肪酸、微量元素、麦角淄醇和少量黄酮类物质[14]，兼具降低血脂、抑制MMP-9活性和抗炎作用等多种功效。据报道，血脂康可能主要通过以下2种机制发挥稳定AS斑块的作用[14]：①降低HMG-CoA还原酶活性，从而减少胆固醇的合成，并通过增加肝脏表面LDL-C受体表达，使血LDL的清除增加；②抑制脂质过氧化反应，减少ox-LDL的生成，抑制泡沫细胞的产生，减轻AS发生发展过程中的炎症反应，保护内皮细胞，从而延缓甚至逆转AS的发生发展。

这些与我们的实验结果相切合，各用药组血脂情况均有所改善，且中西药联合用药组下降最明显，普通剂量瑞舒伐他汀联合血脂康组与小剂量瑞舒伐他汀联合血脂康组两组之间差异不大。在肾脏和主动脉免疫组化中，各用药组MPO、MMP-9表达较生理盐水组均可见不同程度下降，而联合用药组下降最明显，且普通剂量瑞舒伐他汀联合血脂康组与小剂量瑞舒伐他汀联合血脂康组两组之间，未见明显差异。可见中西医联合用药在减低瑞舒伐他汀用量的同时，亦能有效改善动脉硬化中的炎症反应，降低了因长期大量使用瑞舒伐他汀所致肝损伤、肌溶解等副反应的可能性。

综上所述，在ARAS性高血压的治疗中联合应用西药瑞舒伐他汀与中药血脂康，能有效改善血脂水平，减轻AS相关炎症反应，就这一点而言，中西药联合降脂治疗在ARAS性高血压未来的治疗中，能得到更加广泛地推广及运用。