杨茜 肖炳坤 杨建云 黄荣清

摘 要 采用反相和阳离子交换双重保留机理， 无需添加离子对和衍生化试剂， 建立了18种游离氨基酸的液相色谱-质谱联用直接分析方法。采用高效液相色谱-三重四极杆串联质谱（HPLC-MS/MS）系统， 使用OSAKA SODA CAPCELL PAK CR 1∶4 （150 mm × 2.1 mm， 5 μm; SCX∶C18=1∶4）色谱柱， 以0.1%甲酸（A）-乙腈（含0.1%甲酸）（B）-50 mmol/L甲酸铵（C）为流动相进行三元梯度洗脱， 对18种氨基酸进行分离检测， 可得到良好的分析结果。色谱峰面积精密度（RSD）范围为0.7%～5.9%; 标准曲线线性关系良好（R2=0.993～0.999）; 对SD大鼠血清和尿液样品加样回收率范围为92.2%～113.6%。本方法流动相条件简单， 灵敏度高， 可用于血清和尿液中游离氨基酸分析， 为生物样品中氨基酸检测或其它复杂基质中氨基酸的检测提供了新的方法和思路。

关键词 高效液相色谱-串联质谱法; 氨基酸分析; 非衍生化生物样品; 双重保留机理

1 引 言

氨基酸是构成蛋白质的基础， 是生命活动中不可或缺的一类小分子物质。对生物体内氨基酸的分析研究， 有助于了解生命过程， 对于疾病的诊断[1，2]和药物的研究[3，4]具有重要作用。

氨基酸的分离检测技术一直是研究者的关注点之一， 尽管氨基酸分析方法多种多样， 但改进现有方法， 使其具有更好的专属性与灵敏度一直是研究的热点和难点问题[5]。现有分离方法包括毛细管电泳法、 气相色谱法、液相色谱法等， 氨基酸分离后再通过荧光、紫外、蒸发光散射、质谱等检测器进行检测。其中， 液相色谱是一种常用分离手段。在氨基酸的液相分离中， 由于氨基酸类物质含……